内容概要本文聚焦 Elabscience 4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸yan(DAPI)染色液(货号为 E-CK-A163) 的 25μg/mL DAPI 染色液,从产品核心信息、技术背景、检测原理 产品介绍Elabscience 4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚二盐酸yan(DAPI)染色液,浓度设定为 25μg/mL,货号为 E-CK-A163。 应用领域基于其优异的染色性能,该 DAPI 染色液可广泛应用于多种科研技术场景:荧光显微术:用于细胞涂片、组织切片等样本的细胞核定位与观察,清晰呈现细胞形态与核结构。 染色液(货号 E-CK-A163)凭借其高特异性、强灵敏度、优异的光谱兼容性及稳定的性能,成为细胞核染色的理想选择。 众多高影响力文献的引用更是印证了其在科研领域的认可度,相信这款 DAPI 染色液将成为科研人员探索生命奥秘过程中的得力助手,为各类细胞学与分子生物学研究赋能。
实验材料实验前准备:细胞、培养基、Transwell 小室或培养皿、划痕工具 (无菌移液枪尖、划痕刮刀或细胞划痕器)、显微镜、合适的染色试剂 (如结晶紫或 DAPI)。 实验材料实验前准备:Transwell 小室 (通常为 8 μm 的孔径)、细胞、培养基、化学趋化因子、PBS、甲醇或 4% 多聚甲醛、染色试剂 (如结晶紫、DAPI 或吉姆萨染色)、移液器和枪头、显微镜 固定结束后,用 PBS 冲洗细胞两次,去除多余的固定液。(7) 染色细胞:将染色剂 (如 0.1% 的结晶紫溶液) 加入 Transwell 的上室染色 20-30 分钟。 、DAPI 或吉姆萨染色)、移液器和枪头、显微镜。 固定结束后,用 PBS 冲洗细胞 2 次,去除多余的固定液。(7) 染色细胞:将染色剂 (如 0.1% 结晶紫溶液) 加入 Transwell 上室染色 20-30 分钟。
1.2 细胞核染色分析在凋亡细胞中,质膜通透性和染色质浓缩发生变化,可以使用 DAPI、Hoechst 以及碘化丙啶 (PI) 荧光染料, 通过流式细胞仪或荧光显微镜轻松检测到。Figure 5. DAPI, Hoechst 和 PI 的荧光染色效果图[6][7]。(A) 甲基乙二醛(MG)(1.5 mM, 24 h)诱导PC12细胞凋亡,并用PI和Hoechst 33342染色。 (B) DAPI(蓝色)和TUNEL(绿色)染色凋亡的MODE-K细胞。 DAPI, Annexin V-FITC 和 PI 共染的代表性图像,显示 Bufalin (100 nM, 48 h) 诱导 HepG2 细胞凋亡[9]。 添加新鲜培养基并轻轻悬浮细胞 制成单细胞悬浮液。1000 ×g 离心 5 分钟,然后弃去上清液。加入 1 mL 预冷的 PBS 重悬细胞沉淀,1000 ×g 离心 5 分钟弃上清,保留细胞沉淀。2.
免疫染色:直接法 or 间接法?免疫染色主要使用两种方法:间接免疫染色法和直接免疫染色法。间接法:同时使用一抗和二抗。一抗可特异性结合目标抗原。 洗涤:使用 PBS 缓冲液清洗 3 次,以去除残留的固定液。Tips:① 初次实验,建议从 4% 的多聚甲醛,固定 15 min 开始尝试,倘若没有达到预期效果,再调整固定时间或更换另一种固定剂。 洗涤:使用 PBS 缓冲液清洗 3 次,以去除残留通透液。Tips:① 通透剂的浓度和孵育时间应针对所用样品进行优化。 第六步:复染目的使用染色剂对细胞核进行染色,直观地区分细胞核和其他细胞及抗原结构的位置,便于观察和解读实验结果。步骤在清洗完毕的细胞中滴加 DAPI,室温避光静置约 30 s。 因此,在滴加封片液时,需要缓慢而均匀地滴加,并用镊子轻轻调整盖玻片的位置,以确保没有气泡产生。② 选择合适的封片剂:封片剂的选择也很重要。常用的封片剂包括缓冲甘油、抗荧光淬灭封片液等。
免疫荧光染色图片非常绚烂,其实验步骤并不复杂。仅仅是将普通二抗换成荧光标记的二抗,避光操作,DAPI染核,最后采用荧光显微镜在不同波段激发下采集图片,其它步骤几乎与传统的IHC步骤一致。 自发荧光类似于传统IHC的背景性染色。如下图中的大片绿色荧光,几乎都是自发性荧光。 ? 自发荧光的解决办法有两种,采用冰冻切片染色或降低石蜡切片染色的自发荧光。 标本的固定时间不是越久越好,常规固定1-2天即可,最忌讳的就是采用长期浸泡在固定液中的组织进行免疫荧光标记实验。 5 — 抗荧光衰减剂与荧光淬灭剂 现在很多的试剂商都供应了含DAPI的封片剂,不仅可以染核,还有防止荧光淬灭的成分。 对于表达水平较低的抗原来说,使用上述试剂无可厚非。 对于表达较少或荧光信号较低的多标记实验而言,Evan's蓝或者台盼蓝染色可能会降低荧光信号的敏感度。 现在很多的试剂商都供应了含DAPI的封片剂,不仅可以染核,还有防止荧光淬灭的成分。
E-AB-F1186D)、FITC-Lineage(CD3(E-AB-F1013C)、CD19(E-AB-F0986C)、Ly6G(E-AB-F1108C)、CD49b(E-AB-F1116C))流式抗体染色并分析结果 CD64(E-AB-F1186C)、APC-Lineage(CD3(E-AB-F1013E)、CD19(E-AB-F0986E)、Ly6G(E-AB-F1108E)、CD49b(E-AB-F1116E))、DAPI (E-CK-A163)、MerTK系列抗体(火热上线中,详询)流式抗体染色并分析结果检测结果。 数据分析流程:圈出DAPI-的活细胞群,进一步圈出CD45+的白细胞群,再分析圈出lineage-(CD3/CD19/Ly6G/CD49b)细胞群(排除掉T细胞/B细胞/粒细胞/NK细胞),进一步圈出CD11b 三、组织驻留巨噬细胞的检测流程和注意事项(1)脾脏巨噬细胞检测方案①脾脏单细胞悬液的制备:取新鲜的小鼠脾脏样本,研磨法或者使用1 mL注射器吹打等方法制备成单细胞悬液,300×g离心3-5 min,弃上清
pRPA2-S33 免疫荧光(IF)结合 EGFR FISH,在加入 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)30 分钟后;细胞核用 DAPI 共染色。左,代表性图像。 在 37 °C 下孵育过夜后,载玻片用 2× SSC 洗涤以去除非特异性结合,随后进行 DAPI 染色。 载玻片用 DAPI 复染,并用 ProLong Diamond 抗褪色剂封片。 将 100 微升细胞悬液转移到 FACS 管中,并用 FITC Annexin V 和碘化丙啶染色。 对于焦点数量分析,通过自动阈值和分割分析了 DAPI 染色、IF 染色和 DNA FISH 通道,分别对应细胞核、pRPA2S33/γH2AX 焦点和 DNA FISH 焦点。
在 Xenium 原位基因表达测定中,DAPI 图像用于使用机器学习算法推断细胞核边界;然后通过各向同性核膨胀推断细胞边界。 在 Xenium 原位基因表达与细胞分割染色测定中,使用多组织染色和多模式细胞分割方法确定细胞边界。 第一步也是一样的,Nucleus segmentation第一步是使用DAPI图像和自定义神经网络进行核分割来检测核的位置。 基于从细胞核扩展到细胞内部染色边缘的细胞分割方法:该方法包括深度学习模型和使用内部染色推断细胞边界的核扩展方法。采用内部染色(18S rRNA标记)和DAPI染色检测细胞核。 细胞核扩展:对于没有边界或内部染色的细胞,以细胞核(DAPI)扩增距离为5µm或直到遇到另一个细胞边界其中细胞核扩展一旦样品中细胞核的位置被模型识别,一个启发式的细胞边界扩展步骤被执行。
◉ 对指定年龄和基因型的小鼠进行水平视网膜切片,用DAPI(蓝色)和检测粘附连接处F-肌动蛋白的标记物(绿色)、水平细胞(钙调素,绿色)和光感受器前体细胞(CRX,绿色)进行染色。 Para_04 对于整体视网膜染色,眼球被摘除并在4%多聚甲醛中孵育30分钟。 视网膜在4°C下与FITC标记的IB4(Sigma L2895)和DAPI在PBS中孵育1-2天。 简而言之,每张载玻片加入120 μl染色液,覆盖盖玻片并用橡胶水泥密封。 将载玻片放入密封的湿容器中,在37°C的干燥培养箱(无CO2)中孵育1-2天。 洗涤后,用200 μl FACS缓冲液将4 × 105个细胞进行染色,并与藻红蛋白(PE)或别藻蓝蛋白(APC)标记的抗-B220(0.5 μg,12-0452-81)、抗-CD3(0.75 μg,17 孵育结束后,通过移液器将消化液小心地移除而不扰动视网膜。 在含有10% FBS的神经基础培养基中,用P1000移液头缓慢移液10到15次,对视网膜进行机械性研磨。
; (3)DAPI染细胞核时,加入的试剂太多,造成高背景染色; (4)组织切片预处理不当或采用石蜡切片,导致高背景染色; (5)采集图像过程不当,导致原始图像不佳,直接影响后续半定量分析。 (2)目标蛋白的荧光太强,甚至形成非特异性的标记,一些背景染色可能被误认为阳性区域,造成假阳性结果 这种情况一般出现在抗体浓度过高而漂洗又不充分的时候。 (3)DAPI染细胞核时,加入的试剂太多,造成高背景染色 现在都是使用的防荧光衰减DAPI试剂,使用时滴上一滴就能将细胞核标记。 但是这也带来一个小问题。 因此,滴加的DAPI不要太多,只需覆盖上薄薄的一层即可。事实上,个人认为只要切片没有暴露在自然光或者激发光之下,荧光的自然衰减并没有想象中那么快。 (4)组织切片预处理不当或采用石蜡切片,导致高背景染色 如果组织切片,尤其是石蜡切片脱蜡环节不彻底,也会造成区域性的非特异性标记。建议脱蜡一定要彻底,脱蜡前充分烤片也可以帮助脱蜡。
Para_03 我们接下来使用三种正交方法(图1d)研究了单细胞中ecDNA拷贝数的分布:(1) 通过DNA-FISH进行中期染色体扩散;(2) 分离单核并进行基于液滴的单细胞转座酶可及染色质测序(scATAC-seq 移除缓冲液,加入缓冲液 ES(1% N-月桂基肌氨酸钠盐溶液,25 mM pH 8.0 的 EDTA,50 µg ml⁻¹ 蛋白酶 K)。 琼脂糖插件在 50°C 下在缓冲液 ES 中孵育过夜。 细胞核用 4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)(50 ng/ml)在 2× SSC 中染色约 1 分钟,然后在双蒸水中快速洗一次。 风干的样品用 ProLong Diamond 封片。 图像被拆分为两个 FISH 颜色通道和 DAPI 通道,并手动设置信号阈值以去除背景荧光。 使用分水岭分割方法对重叠的 FISH 信号进行分割。 将DAPI(100 ng ml-1)应用于样品10分钟。 样品再次用2× SSC 0.1% Tween-20洗涤,然后用2× SSC洗涤。
8.5 周胎龄胚胎的渲染图像的 3D 视图、分割的软骨颅和用于 3D 渲染的网格图像(上排);两个样本中软骨颅的 COL2A1 染色(中排);以及整个颅骨上的 COL2A1 和骨桥蛋白(SP7)染色叠加图像 所得的细胞悬液用DAPI(Invitrogen)进行活细胞染色,使用FGFR3抗体(1:50;Thermo Fisher Scientific)和TACR3抗体(1:50;Thermo Fisher Scientific ),以及二级抗体进行染色。 通过BigFoot光谱细胞分选仪(Thermo Fisher Scientific)及其专有软件,对DAPI阳性的单细胞进行DAPI染色的FACS门控。 接下来,我们使用Microaligner(版本1.0.0)基于DAPI信号注册所有周期,使用默认参数。
2243: [SDOI2011]染色 Time Limit: 20 Sec Memory Limit: 512 MB Submit: 3113 Solved: 1204 [Submit][Status 下面 行每行描述一个操作: “C a b c”表示这是一个染色操作,把节点a到节点b路径上所有点(包括a和b)都染成颜色c; “Q a b”表示这是一个询问操作,询问节点a到节点b(包括a和b)路径上的颜色段数量
细胞凋亡的主要形态学特征包括:染色质固缩、DNA 片段化、细胞膜起泡、细胞皱缩、凋亡小体的形成等。 1.2 细胞核染色检测细胞凋亡时,细胞膜通透性增强,染色质发生固缩,故经 DAPI、Hoechst系列等荧光染料染色后可快速检测细胞凋亡。除了实验操作简单、成本低廉之外,细胞核染色还可以定量。 碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色液是一种不能穿透细胞膜的红色荧光染料,可对凋亡晚期细胞及坏死细胞染色。 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒采用碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色的方法检测细胞周期和细胞凋亡。 细胞凋亡检测试剂盒 (Hoechst 法)采用 Hoechst 33258 染色的方法快速检测细胞凋亡。
如图1a所示,首先使用垂向鞘流将水平流动的样品聚集到玻璃盖玻片附近,从而保证光镊较高的捕获率并使用鞘液将样品与PDMS隔开防止其对拉曼光谱的干扰(注sheath flow:微流控中的鞘流技术,在细胞计数中为了避免细胞从小孔边缘处流过及湍流 、涡流的影响,用毛细管对准小孔管,细胞混悬液从毛细管喷出。 同时与四周流出的鞘液一起流过敏感区,保证细胞混悬液在中间形成单个排列的细胞流,四周被鞘液围绕),实际效果如下面视频1所示。 作者将氘标记的大肠杆菌细胞使用DAPI染色(附件图2a所示),然后输入平台进行连续一小时的运行分选,收集到的细胞在荧光显微镜下进行计数,最终计算可得回收效率为82.1± 2.7%。 接下来评估分选准确率,作者将没有氘标记的大肠杆菌细胞用DAPI染色,并与氘标记的细胞进行1比1混合(附件图2b所示),然后输入平台连续一小时的运行分选,然后检测收集的细胞中DAPI染色细胞(也即未标记细胞
1191 数轴染色 时间限制: 1 s 空间限制: 128000 KB 题目等级 : 黄金 Gold 题目描述 Description 在一条数轴上有N个点,分别是1~N。
接着,将类器官在 Dispase I 溶液中于 37°C 再次孵育 10 分钟,并通过移液操作获得单细胞悬液。 在杂交后的洗涤步骤完成后,用 DAPI(1 μg ml−1,Kreatech, Leica)对载玻片进行复染。 细胞核被采集并显示为蓝色(DAPI)。 对于 PDOs,图像通过 Leica TCS SP5 荧光显微镜获取。 细胞核通过 DAPI 荧光染料进行复染和可视化。 根据荧光强度区分每个荧光通道(HEX 和 FAM)中的阳性液滴和阴性液滴,使用全局阈值设定,该阈值基于阴性液滴中探针不完全淬灭导致的最小本征荧光信号,与含有扩增模板(或模板)的液滴中切割探针产生的强荧光信号对比
新年第一篇,一位读者朋友后台留言咨询关于水箱液位控制的问题,因为没描述具体的问题需求,本文分享一篇Matlab自带的样例-基于模糊理论的水箱液位控制。 该模型实现了在Simulink模型中模糊推理系统(FIS)+水箱液位控制。 Simulink模型 该模型使用模糊逻辑控制器块实现的模糊推理系统来控制水箱中的水位。
常见的5号干电池通常为碳锌电池、碱性电池,以往的认知中,对于电池漏液的现象,最常见于家里的遥控器、收音机、手电筒等,电池放了一年半载之后,取出电池时才发现电池渗出了液体,变得黏黏的。 对于种类繁多的电池,除了锂铁电池、镍镉电池,基本上都会有漏液的特性存在。 ,其相比碳性电池而言漏液几率较低,但是也会存在密封胶老化或者使用不当等情况导致损坏漏液,其流出液体为强腐蚀性的氢氧化钾。 碳锌电池 VS 碱性电池 在应用因素上: 在离子的各种反应中,H+会获得电子,形成H2,由此当电池过度放电时,电池内部会出现气体,当气体太多的时候会从电池的泄压阀泄出,由此造成漏液问题。 电池漏液如何判定 1. 对于碱性电池,由于漏出来的液体为强碱性质,因此可以使用PH试纸进行对比判定; 2.
c 一例代表性 ICC 患者组织的多重免疫荧光染色(ARG1、CK19、CD68 和 DAPI)。ARG1、CK19 和 CD68 分别是肝细胞、恶性细胞和巨噬细胞的标志物。 DAPI)显示的边缘区域 Hep1 和 Hep2 亚型的空间分布点图。 h 多重免疫荧光染色(ARG1、STAT3、SAAs 和 DAPI)显示 STAT3 在浸润区 SAAs 肝细胞中的高表达(来自验证队列 4 的代表性 ICC 患者)。 多重免疫荧光染色(CXCL6、SAAs、CK19 和 DAPI)显示肿瘤细胞靠近 SAAs 周围肝细胞边缘的高 CXCL6 表达(验证队列 4 的 ICC 患者)。 、CD68、SAAs 和 DAPI)。