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  • 来自专栏流式抗体推文

    Elabscience 4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色,精准标记每一个核

    内容概要本文聚焦 Elabscience 4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸yan(DAPI)染色(货号为 E-CK-A163) 的 25μg/mL DAPI 染色,从产品核心信息、技术背景、检测原理 产品介绍Elabscience 4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚二盐酸yan(DAPI染色,浓度设定为 25μg/mL,货号为 E-CK-A163。 应用领域基于其优异的染色性能,该 DAPI 染色可广泛应用于多种科研技术场景:荧光显微术:用于细胞涂片、组织切片等样本的细胞核定位与观察,清晰呈现细胞形态与核结构。 染色(货号 E-CK-A163)凭借其高特异性、强灵敏度、优异的光谱兼容性及稳定的性能,成为细胞核染色的理想选择。 众多高影响力文献的引用更是印证了其在科研领域的认可度,相信这款 DAPI 染色将成为科研人员探索生命奥秘过程中的得力助手,为各类细胞学与分子生物学研究赋能。

    49510编辑于 2025-09-18
  • 细胞迁移 VS 侵袭大不同!想要划痕和 Transwell 实验的实操?包会的! | MedChemExpress (MCE)

    实验材料实验前准备:细胞、培养基、Transwell 小室或培养皿、划痕工具 (无菌移枪尖、划痕刮刀或细胞划痕器)、显微镜、合适的染色试剂 (如结晶紫或 DAPI)。 实验材料实验前准备:Transwell 小室 (通常为 8 μm 的孔径)、细胞、培养基、化学趋化因子、PBS、甲醇或 4% 多聚甲醛、染色试剂 (如结晶紫、DAPI 或吉姆萨染色)、移液器和枪头、显微镜 固定结束后,用 PBS 冲洗细胞两次,去除多余的固定。(7) 染色细胞:将染色剂 (如 0.1% 的结晶紫溶液) 加入 Transwell 的上室染色 20-30 分钟。 、DAPI 或吉姆萨染色)、移液器和枪头、显微镜。 固定结束后,用 PBS 冲洗细胞 2 次,去除多余的固定。(7) 染色细胞:将染色剂 (如 0.1% 结晶紫溶液) 加入 Transwell 上室染色 20-30 分钟。

    1.6K11编辑于 2024-11-18
  • 来自专栏生命科学

    细胞凋亡检测方法有哪些?常用的细胞凋亡检测实验步骤 | MCE

    1.2 细胞核染色分析在凋亡细胞中,质膜通透性和染色质浓缩发生变化,可以使用 DAPI、Hoechst 以及碘化丙啶 (PI) 荧光染料, 通过流式细胞仪或荧光显微镜轻松检测到。Figure 5. DAPI, Hoechst 和 PI 的荧光染色效果图[6][7]。(A) 甲基乙二醛(MG)(1.5 mM, 24 h)诱导PC12细胞凋亡,并用PI和Hoechst 33342染色。 (B) DAPI(蓝色)和TUNEL(绿色)染色凋亡的MODE-K细胞。 JC-1 染色参考[11]:悬浮细胞1. 以 6 孔板为例,每孔用 1 mL 培养基重悬 100 万细胞,并根据实验处理细胞。2. ;14(1):1370-82.[10] Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3(11):e430.[11] Lv M, et al.

    1.4K11编辑于 2025-05-19
  • 来自专栏流式抗体推文

    告别检测困扰!Elabscience 教你高效区分脾脏、骨髓等组织驻留巨噬细胞

    (CD3(E-AB-F1013C)、CD19(E-AB-F0986C)、Ly6G(E-AB-F1108C)、CD49b(E-AB-F1116C))流式抗体染色并分析结果。 (CD3(E-AB-F1013E)、CD19(E-AB-F0986E)、Ly6G(E-AB-F1108E)、CD49b(E-AB-F1116E))、DAPI(E-CK-A163)、MerTK系列抗体(火热上线中 ,详询)流式抗体染色并分析结果检测结果。 数据分析流程:圈出DAPI-的活细胞群,进一步圈出CD45+的白细胞群,再分析圈出lineage-(CD3/CD19/Ly6G/CD49b)细胞群(排除掉T细胞/B细胞/粒细胞/NK细胞),进一步圈出CD11b C57腹腔炎症小鼠取腹水样本,使用Mouse CD11b(E-AB-F1081D)、F4/80(E-AB-F0995Q)、CD86(E-AB-F0994H)、CD206(E-AB-F1135E)染色并使用流式细胞仪检测分析巨噬细胞的功能分型

    77710编辑于 2025-09-22
  • AbMole荧光染料:点亮您的科研成功之路

    细胞核染色细胞核染料主要有DAPI和Hoechst系列产品。DAPI的最大激发和发射波长分别为350和460 nm,发蓝色荧光。DAPI无法活染,一般DAPI染色前需要对细胞进行多聚甲醛的固定。 Hoechst则可以对活细胞进行染色,一般在延时成像等持续性的荧光观察实验中会用到该产品,其最大激发和发射波长与DAPI相接近。图3 Hoechst 33342染色效果图2. 图4 JC-1染色效果图3.活死细胞染色试剂盒:Calcein AM /PI当需要对细胞的存活和死亡进行分析时,可以使用Calcein AM /PI双重染色法。 脂质过氧化物探针BODIPY C11 581/591可用于检测细胞的脂质过氧化情况。 而在还原状态下,BODIPY C11 581/591 十一烷酸的激发和发射最大值为 581/591 nm,发红色荧光。目前,该染料是铁死亡研究的常用产品。

    23400编辑于 2025-12-23
  • 常见实验技术∶ 免疫染色 (IHCICCIF) Get 全流程!_MedChemExpress(MCE 中国)

    免疫染色:直接法 or 间接法?免疫染色主要使用两种方法:间接免疫染色法和直接免疫染色法。间接法:同时使用一抗和二抗。一抗可特异性结合目标抗原。 洗涤:使用 PBS 缓冲清洗 3 次,以去除残留的固定。Tips:① 初次实验,建议从 4% 的多聚甲醛,固定 15 min 开始尝试,倘若没有达到预期效果,再调整固定时间或更换另一种固定剂。 洗涤:使用 PBS 缓冲清洗 3 次,以去除残留通透。Tips:① 通透剂的浓度和孵育时间应针对所用样品进行优化。 第六步:复染目的使用染色剂对细胞核进行染色,直观地区分细胞核和其他细胞及抗原结构的位置,便于观察和解读实验结果。步骤在清洗完毕的细胞中滴加 DAPI,室温避光静置约 30 s。 因此,在滴加封片时,需要缓慢而均匀地滴加,并用镊子轻轻调整盖玻片的位置,以确保没有气泡产生。② 选择合适的封片剂:封片剂的选择也很重要。常用的封片剂包括缓冲甘油、抗荧光淬灭封片等。

    99011编辑于 2025-06-25
  • 来自专栏技术文章

    选对染料少走弯路,Elabscience 流式死活染色试剂获全球科研认可

    相同样本排除死细胞前后结果对比(A组未加死活染料染色,B组加入PI染料进行染色)2. 自发荧光干扰:死细胞会导致背景自发荧光增强,其信号强度甚至可能超过某些荧光素的真实信号。 核酸染料(适用于未固定样本)该方法的原理基于活细胞膜的完整性:活细胞因膜结构保持完整,具有选择透过性,使得PI、7-AAD、DAPI这类核染料无法进入细胞内部,因此不会显现荧光;而死细胞由于膜已破损,染料可进入细胞内并与核酸结合 使用时,在完成流式抗体染色后,于上机前加入核酸染料并进行短暂孵育。 使用时,在流式抗体染色前进行死活细胞染色,清洗后细胞可继续进行固定和破膜操作,且其荧光信号不会丢失。不同样本如何选择?并非所有样本都必须要进行死活染色。根据我们的经验,为您提供以下实操建议:1. 但若不太新鲜或处理不当,仍建议染色。2. 脾脏/淋巴结等组织:样本制备难度相对容易,可根据单细胞悬的质量决定。若镜下可见较多碎片,建议进行染色。3.

    9600编辑于 2025-12-31
  • 来自专栏聊点学术

    如何降低荧光实验的自发荧光?

    免疫荧光染色图片非常绚烂,其实验步骤并不复杂。仅仅是将普通二抗换成荧光标记的二抗,避光操作,DAPI染核,最后采用荧光显微镜在不同波段激发下采集图片,其它步骤几乎与传统的IHC步骤一致。 自发荧光类似于传统IHC的背景性染色。如下图中的大片绿色荧光,几乎都是自发性荧光。 ? 自发荧光的解决办法有两种,采用冰冻切片染色或降低石蜡切片染色的自发荧光。 标本的固定时间不是越久越好,常规固定1-2天即可,最忌讳的就是采用长期浸泡在固定中的组织进行免疫荧光标记实验。 5 — 抗荧光衰减剂与荧光淬灭剂 现在很多的试剂商都供应了含DAPI的封片剂,不仅可以染核,还有防止荧光淬灭的成分。 对于表达水平较低的抗原来说,使用上述试剂无可厚非。 对于表达较少或荧光信号较低的多标记实验而言,Evan's蓝或者台盼蓝染色可能会降低荧光信号的敏感度。 现在很多的试剂商都供应了含DAPI的封片剂,不仅可以染核,还有防止荧光淬灭的成分。

    2.7K60发布于 2020-07-22
  • 来自专栏生信菜鸟团

    Nature ecDNA 系列 | 增强转录-复制冲突能够靶向消除含有 ecDNA 的癌症

    pRPA2-S33 免疫荧光(IF)结合 EGFR FISH,在加入 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)30 分钟后;细胞核用 DAPI染色。左,代表性图像。 在 37 °C 下孵育过夜后,载玻片用 2× SSC 洗涤以去除非特异性结合,随后进行 DAPI 染色。 Para_02 为了通过荧光原位杂交(FISH)检测 ecDNA,从 RP11-440N18 BAC DNA 制备了 Cy5 标记的探针,该 DNA 经超声处理至 150 bp 并使用 DNA 标记试剂盒 载玻片用 DAPI 复染,并用 ProLong Diamond 抗褪色剂封片。 对于焦点数量分析,通过自动阈值和分割分析了 DAPI 染色、IF 染色和 DNA FISH 通道,分别对应细胞核、pRPA2S33/γH2AX 焦点和 DNA FISH 焦点。

    76810编辑于 2024-12-20
  • 来自专栏生信菜鸟团

    Nature | 什么可以决定细胞的癌变能力?

    ◉ h,代表性流式细胞术直方图显示 P8 视网膜和脾脏中 B220+ B 细胞、CD3+ T 细胞、NKp46+ 自然杀伤(NK)细胞、CD11b+ 巨噬细胞/小胶质细胞和 CD45+ 白细胞的比例。 ◉ 对指定年龄和基因型的小鼠进行水平视网膜切片,用DAPI(蓝色)和检测粘附连接处F-肌动蛋白的标记物(绿色)、水平细胞(钙调素,绿色)和光感受器前体细胞(CRX,绿色)进行染色。 Para_04 对于整体视网膜染色,眼球被摘除并在4%多聚甲醛中孵育30分钟。 视网膜在4°C下与FITC标记的IB4(Sigma L2895)和DAPI在PBS中孵育1-2天。 简而言之,每张载玻片加入120 μl染色,覆盖盖玻片并用橡胶水泥密封。 将载玻片放入密封的湿容器中,在37°C的干燥培养箱(无CO2)中孵育1-2天。 洗涤后,用200 μl FACS缓冲将4 × 105个细胞进行染色,并与藻红蛋白(PE)或别藻蓝蛋白(APC)标记的抗-B220(0.5 μg,12-0452-81)、抗-CD3(0.75 μg,17

    37010编辑于 2025-06-08
  • 来自专栏生命科学

    细胞凋亡——如何检测?| MedChemExpress

    细胞凋亡的主要形态学特征包括:染色质固缩、DNA 片段化、细胞膜起泡、细胞皱缩、凋亡小体的形成等。 1.2 细胞核染色检测细胞凋亡时,细胞膜通透性增强,染色质发生固缩,故经 DAPI、Hoechst系列等荧光染料染色后可快速检测细胞凋亡。除了实验操作简单、成本低廉之外,细胞核染色还可以定量。 碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色是一种不能穿透细胞膜的红色荧光染料,可对凋亡晚期细胞及坏死细胞染色。 细胞凋亡检测试剂盒 (Hoechst 法)采用 Hoechst 33258 染色的方法快速检测细胞凋亡。 Cell Prolif. 2020, 53(11): e12915.2. Liu L, Fan J, Ai G, et al.

    88830编辑于 2023-02-06
  • 来自专栏生信菜鸟团

    细胞图谱 | Nature | 人类胚胎骨骼发育的多组学图谱

    为了解决这个问题,我们应用了单核配对RNA(snRNA)和转座酶可及染色质(snATAC)测序(seq)以及空间方法,以揭示5至11 PCW期间胚胎颅骨和四肢中不同骨形成和关节形成生态位成熟的调控景观。 所得的细胞悬DAPI(Invitrogen)进行活细胞染色,使用FGFR3抗体(1:50;Thermo Fisher Scientific)和TACR3抗体(1:50;Thermo Fisher Scientific ),以及二级抗体进行染色。 通过BigFoot光谱细胞分选仪(Thermo Fisher Scientific)及其专有软件,对DAPI阳性的单细胞进行DAPI染色的FACS门控。 接下来,我们使用Microaligner(版本1.0.0)基于DAPI信号注册所有周期,使用默认参数。

    99910编辑于 2024-12-27
  • 基于image-based的空间转录组的细胞分割技术

    在 Xenium 原位基因表达测定中,DAPI 图像用于使用机器学习算法推断细胞核边界;然后通过各向同性核膨胀推断细胞边界。 在 Xenium 原位基因表达与细胞分割染色测定中,使用多组织染色和多模式细胞分割方法确定细胞边界。 第一步也是一样的,Nucleus segmentation第一步是使用DAPI图像和自定义神经网络进行核分割来检测核的位置。 基于从细胞核扩展到细胞内部染色边缘的细胞分割方法:该方法包括深度学习模型和使用内部染色推断细胞边界的核扩展方法。采用内部染色(18S rRNA标记)和DAPI染色检测细胞核。 细胞核扩展:对于没有边界或内部染色的细胞,以细胞核(DAPI)扩增距离为5µm或直到遇到另一个细胞边界其中细胞核扩展一旦样品中细胞核的位置被模型识别,一个启发式的细胞边界扩展步骤被执行。

    85910编辑于 2024-05-30
  • 来自专栏生信菜鸟团

    Nature ecDNA 系列 | 癌细胞中 ecDNA 的协调遗传

    Para_03 我们接下来使用三种正交方法(图1d)研究了单细胞中ecDNA拷贝数的分布:(1) 通过DNA-FISH进行中期染色体扩散;(2) 分离单核并进行基于滴的单细胞转座酶可及染色质测序(scATAC-seq 我们最近在亲本 SNU16 胃癌细胞系中发现了一种 ecDNA 物种,其中不包含致癌基因编码序列,而是源自 WDR11 和 FGFR2 之间的非编码基因组区域。 细胞核用 4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)(50 ng/ml)在 2× SSC 中染色约 1 分钟,然后在双蒸水中快速洗一次。 风干的样品用 ProLong Diamond 封片。 图像被拆分为两个 FISH 颜色通道和 DAPI 通道,并手动设置信号阈值以去除背景荧光。 使用分水岭分割方法对重叠的 FISH 信号进行分割。 将DAPI(100 ng ml-1)应用于样品10分钟。 样品再次用2× SSC 0.1% Tween-20洗涤,然后用2× SSC洗涤。

    73910编辑于 2024-12-05
  • 来自专栏聊点学术

    【附加篇】免疫荧光相关的注意事项

    ; (3)DAPI染细胞核时,加入的试剂太多,造成高背景染色; (4)组织切片预处理不当或采用石蜡切片,导致高背景染色; (5)采集图像过程不当,导致原始图像不佳,直接影响后续半定量分析。 (2)目标蛋白的荧光太强,甚至形成非特异性的标记,一些背景染色可能被误认为阳性区域,造成假阳性结果 这种情况一般出现在抗体浓度过高而漂洗又不充分的时候。 (3)DAPI染细胞核时,加入的试剂太多,造成高背景染色 现在都是使用的防荧光衰减DAPI试剂,使用时滴上一滴就能将细胞核标记。 但是这也带来一个小问题。 因此,滴加的DAPI不要太多,只需覆盖上薄薄的一层即可。事实上,个人认为只要切片没有暴露在自然光或者激发光之下,荧光的自然衰减并没有想象中那么快。 (4)组织切片预处理不当或采用石蜡切片,导致高背景染色 如果组织切片,尤其是石蜡切片脱蜡环节不彻底,也会造成区域性的非特异性标记。建议脱蜡一定要彻底,脱蜡前充分烤片也可以帮助脱蜡。

    2.7K20发布于 2020-12-11
  • 来自专栏生命科学

    铁死亡检测方法指南:关键标志物分析与染色方法指南 | MCE

    客户验证BODIPY 581/591 C11 染色参考1. 储备及工作的制备:(1) 用 DMSO 配制 10 mM BODIPY 581/591 C11 储备(-20°C 或 -80°C 避光保存,避免反复冻融)。 (2) 染色前用无血清细胞培养基或 PBS 稀释储备,制备 2-10 μM BODIPY 581/591 C11 工作(请根据实际情况调整工作浓度)。2. 客户验证H2DCFDA 染色方法参考1. 储备及工作的制备 :(1) 用DMSO配制5mM的H2DCFDA储备(-20°C或 -80°C避光保存,避免反复冻融)。 (2) 染色前用无血清细胞培养基或PBS稀释储备,配制成1-10μM的H2DCFDA工作。(请根据实际情况调整工作浓度)。2.

    2.4K12编辑于 2025-06-30
  • 来自专栏Chris生命科学小站五年归档

    【Science】ChromEMT揭示纳米尺度染色质组织方式

    长期以来的教科书模型认为,11纳米的DNA-核心核小体聚合物首先组装成30纳米的纤维,进一步折叠成120纳米的染色体线状结构,然后形成300到700纳米的染色单体,最终形成有丝分裂染色体。 在间期细胞核中,染色质具有更加伸展的弯曲结构,而在有丝分裂染色体支架中则形成紧凑的环和相互作用的结构。为了分析染色质的压缩情况,我们创建了染色质体积浓度(CVC)的三维网格图。 细胞在不含钙和镁的Hank's平衡盐溶液中洗涤3次,然后在室温下使用5 mM的CaCl2、0.1 M的溴甘醇酸钠缓冲中的2.5%高纯级戊二醛进行固定。 7. 细胞在0.1 M的溴甘醇酸钠缓冲中洗涤五次,然后使用阻断缓冲进行阻断。 8. 细胞使用DRAQ5在0.1%皂苷、0.1 M溴甘醇酸钠缓冲染色,然后用阻断缓冲洗涤。 9. 洗去多余染料后,细胞在0.1 M溴甘醇酸钠缓冲中浸泡在二氨基苯胺四盐酸盐中。 10. 细胞放置在设置在4℃的冷阶段的显微镜上,使用特定镜头和滤光片进行成像。 11.

    48510编辑于 2023-08-29
  • 来自专栏微生态与微进化

    Nature新技术分享:自动化拉曼光谱仪用于活细胞功能分类

    如图1a所示,首先使用垂向鞘流将水平流动的样品聚集到玻璃盖玻片附近,从而保证光镊较高的捕获率并使用鞘将样品与PDMS隔开防止其对拉曼光谱的干扰(注sheath flow:微流控中的鞘流技术,在细胞计数中为了避免细胞从小孔边缘处流过及湍流 、涡流的影响,用毛细管对准小孔管,细胞混悬从毛细管喷出。 同时与四周流出的鞘一起流过敏感区,保证细胞混悬在中间形成单个排列的细胞流,四周被鞘围绕),实际效果如下面视频1所示。 作者将氘标记的大肠杆菌细胞使用DAPI染色(附件图2a所示),然后输入平台进行连续一小时的运行分选,收集到的细胞在荧光显微镜下进行计数,最终计算可得回收效率为82.1± 2.7%。 接下来评估分选准确率,作者将没有氘标记的大肠杆菌细胞用DAPI染色,并与氘标记的细胞进行1比1混合(附件图2b所示),然后输入平台连续一小时的运行分选,然后检测收集的细胞中DAPI染色细胞(也即未标记细胞

    1.4K30编辑于 2022-05-05
  • 来自专栏生命科学

    H2DCFDA | ROS 荧光探针检测法

    H2DCFDA 工作的配制 1、储存的配制:用 DMSO 注:H2DCFDA 储存建议分装后-20℃ 避光冻存,一个月。-80 半年。 2、工作的配制:用预热好的无血清细胞培养基或缓冲 (如 PBS) 稀释储存,配制终浓度为 5-10 μM 的 H2DCFDA 工作 (1×)。 除了上述柱头染色, 还可用于原生质体染色,如图 4 所示,用 H2DCFDA 对原生质体进行染色以检测 ROS 的产生,并通过活细胞成像 (Live-cell imaging) 跟踪整个过程。 Cell Death Dis. 2020 Oct 31;11(10):938. 2.

    1.5K10编辑于 2023-03-10
  • 来自专栏生信菜鸟团

    中性粒细胞的“核”秘密:loop-extrusion

    一、形态特征 项目 特征描述 核形态 呈现完整环状或圆环状(toroid),类似甜甜圈结构 染色 DAPI、Hoechst 等染核染料下清晰可见中心空腔 细胞表面标志物 通常仍表达 LY6G、CD11b 研究表明,在中性粒细胞前体细胞中,阻断环挤压(loop-extrusion)——一种通过牵引染色质形成DNA环的马达驱动过程——会导致多叶核基因组的形成。 环挤压的作用:染色质环挤压是由cohesin复合物介导的过程,负责将染色质组织成拓扑相关结构域(TADs)。 染色质结构的重塑:研究观察到,在NIPBL耗竭的细胞中,染色质形成了大型环(mega-loops)和染色体间的相互作用中心(interchromosomal hubs),这些结构富含中性粒细胞特异性的增强子和炎症基因 结论与意义 研究表明,染色质环挤压程序在中性粒细胞核形态的形成中起着决定性作用。通过调控环挤压,可以重塑染色质的三维结构,进而影响核的几何形态和细胞功能。

    50400编辑于 2025-05-01
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