薄膜过滤计数法检测大肠杆菌数是一种常用的微生物检测方法,其原理是通过将待测液体通过一张具有微孔的薄膜,使液体中的微生物被滞留在薄膜表面,从而实现微生物的分离和检测。以下是薄膜过滤计数法检测大肠杆菌数的详细步骤:
一、准备工作
无菌准备:确保所有使用的设备和材料都是无菌的,包括培养皿、过滤器、无菌水等。
培养皿准备:准备足够数量的无菌培养皿,每个培养皿上标上待测样品的记号,并另备一个作对照组。
培养剂选择:选择适合大肠杆菌生长的培养剂,如MF-Endo培养剂。
二、过滤器的准备
过滤器支架消毒:将过滤器支架或过滤器座、漏斗和漏斗盖进行消毒,可以使用沸水或95%酒精进行处理。
安装过滤器:将无菌过滤器的底座部分安装于过滤烧瓶或真空管道上,然后在过滤器底座上放置一张无菌薄膜,注意选择合适的过滤膜(如0.45um薄膜)。
组装过滤器:将过滤器漏斗和漏斗盖放置于底座上,并确保待过滤器的温度低于40℃后才可加样品。
三、样品的过滤和平板培养
样品过滤:无菌地将待测液体直接倒入已消毒和冷却的过滤器漏斗中,并盖上过滤器漏斗的盖子。
冲洗:施加真空,使样品通过薄膜。然后用无菌水对薄膜进行冲洗,以确保所有的微生物都被滞留在薄膜上。
四、菌落培养与计数
转移薄膜:将过滤后的薄膜转移到一个含有适当培养剂的培养皿上,确保滤膜上的微生物面向上,并完全紧贴培养基。
培养:将培养皿在适宜的温度(如35℃±2℃)下培养适当的时间(如24-48小时)。
菌落计数:观察并记录培养皿上的菌落数量。通过菌落的数量和稀释倍数,可以计算出原始样品中的大肠杆菌数量。
五、注意事项
无菌操作:在整个实验过程中,必须严格遵守无菌操作规范,以防止杂菌的污染。
培养条件:确保培养条件(如温度、时间等)适宜,以获得准确的实验结果。
设备清洁:使用后及时清洗和消毒所有设备,以避免污染和交叉感染。
通过以上步骤,可以准确地使用薄膜过滤计数法检测大肠杆菌数。这种方法在环境监测、食品检测、临床检验等领域具有广泛的应用。
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