非无菌检查法检测微生物限度的方法是什么

非无菌检查法检测微生物限度的方法是什么？非无菌检查法检测微生物限度主要有以下方法：

一、供试液制备

液体供试品：

取供试品，若供试品需用稀释剂稀释后使用，应根据供试品的性质选择适宜的稀释剂，如 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液、pH6.8 无菌磷酸盐缓冲液等。

取规定量的供试品，直接或用适宜的稀释剂制成 1:10 的供试液。对于较黏稠的供试品，可加入适量的稀释剂，充分振摇，使其均匀分散。

固体供试品：

取供试品，研细，称取规定量，加入适量的稀释剂，充分研磨均匀后，制成 1:10 的供试液。

对于难溶性固体供试品，可采用超声处理、加热等方法促进其溶解或分散在稀释剂中。

二、微生物计数法

平皿法：

取规定量的供试液，按方法适用性试验确认的方法进行菌数测定。吸取不同稀释级的供试液各适量，分别注入到无菌平皿中，每个稀释级至少制备 2 个平板。

将预先熔化并冷却至 45℃左右的培养基倾注到平皿中，以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基混匀，放置，待凝。

培养：需氧菌总数计数平板倒置于 30～35℃培养箱中培养 3～5 天;霉菌和酵母菌总数计数平板倒置于 20～25℃培养箱中培养 5～7 天，必要时可延长至 7 天。

计数：培养结束后，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。

薄膜过滤法：

所采用滤膜孔径应不大于 0.45μm，直径约为 50mm(若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整)。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌，使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。

水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜;油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。将供试液加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。用 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为 100ml，总冲洗量不得超过 1000ml。

取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养，每种培养基至少制备一张滤膜。

培养和计数同平皿法。

三、控制菌检查法

大肠埃希菌检查：

取供试液适量，接种至适量(不少于 10ml)的胰酪大豆胨液体培养基中，在 30～35℃培养 18～24 小时。

取上述培养物 1ml，接种至 100ml 麦康凯液体培养基中，在 42～44℃培养 24～48 小时，观察是否有混浊生长。

若有混浊生长，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，在 30～35℃培养 18～72 小时，观察菌落形态。若麦康凯琼脂培养基平板上生长的菌落为鲜桃红色或微红色，圆形，扁平或微凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，应进行进一步的鉴定试验。

通过生化试验等方法确认是否为大肠埃希菌。

金黄色葡萄球菌检查：

取供试液适量，接种至适量(不少于 10ml)的胰酪大豆胨液体培养基中，在 30～35℃培养 18～24 小时。

取上述培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上，在 30～35℃培养 18～72 小时，观察菌落形态。若甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上生长的菌落为金黄色，圆形，凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，应进行进一步的鉴定试验。

通过生化试验等方法确认是否为金黄色葡萄球菌。

四、结果判断

微生物计数结果判断：

需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌数小于 100cfu 的稀释级，作为菌数报告的依据。以最高的平均菌落数，计算 1g、1ml 或 10cm² 供试品中所含的微生物，取两位有效数字报告。

若各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于 1 时，以<1 乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

控制菌检查结果判断：

若供试品检出控制菌，应按规定进行进一步的鉴定试验，确认是否为该控制菌。若确证为控制菌，应判供试品不符合规定;若未检出控制菌，应判供试品符合规定。