**摘要：** 选择免疫组化封片剂时，需要先明确显色产物能否耐受乙醇脱水和二甲苯透明，再考虑固化、封边及保存要求。AEC和部分Fast Red显色体系适合采用水性封片，而DAB等显色体系可使用相应的脱水与树脂封片流程。本文结合常见显色体系的溶剂兼容性，以及Polysciences Aqua-Poly/Mount的产品资料，介绍水性封片剂的选择思路、固化条件和使用要点。

**关键词：免疫组化封片、水性封片剂、AEC封片、Fast Red显色、DAB染色、切片保存、封片剂固化、盖玻片封边、Aqua-Poly/Mount**

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## 一、选择封片剂，先确认显色产物是否耐醇

免疫组化染色结束后，封片方式需要与显色体系相匹配。AEC形成的玫瑰红色沉淀可溶于醇等有机溶剂，若继续进行梯度乙醇脱水、二甲苯透明和常规树脂封片，可能使红色变浅甚至消失。对这类醇敏显色体系，兼容的水性封片剂能使切片从水相进入封片步骤，省去不适合的脱水处理。

DAB形成的棕色反应产物则可耐受常规有机溶剂处理，因此可以按相应流程脱水、透明和树脂封片。两者的差异来自显色反应产物的性质，选择时应查阅具体显色试剂的说明，而不是只比较切片颜色或染色强弱[1]。

| 显色体系 | 常见颜色 | 对醇及常规有机溶剂的兼容性 | 可参考的封片路径 |
| :---: | :---: | :---: | :---: |
| AEC | 玫瑰红 | 显色产物可溶，避免乙醇和二甲苯处理 | 水性封片，不进行常规脱水、透明 |
| Fast Red TR与Naphthol AS-MX phosphate体系 | 亮红 | 显色产物可溶于醇等有机溶剂 | 使用兼容的水性封片剂 |
| Fast Blue BB与Naphthol AS-MX phosphate体系 | 蓝 | 显色产物可溶于醇等有机溶剂 | 使用兼容的水性封片剂 |
| 4-氯-1-萘酚（CN） | 蓝 | 显色产物可溶于醇等有机溶剂 | 水性封片，避免含醇后处理 |
| TRAP染色 | 红至红褐，随配方而异 | 由具体底物与显色配方决定 | 按试剂盒要求选择水性封片或风干观察等方式 |
| DAB | 棕 | 显色产物耐受常规脱水和透明处理 | 可采用脱水、透明及树脂封片 |
| New Fuchsin常规碱性磷酸酶显色体系 | 红 | 相应显色产物不溶于醇等有机溶剂 | 按对应方案脱水并树脂封片 |

**表1：常见显色体系与可参考的封片路径。表中比较的是反应后的显色产物；具体商品化配方以说明书为准[1,3]。**

表中的Fast Red TR和Fast Blue BB特指所列底物组合，不能将其性质直接推广到所有名称中含有“Fast Red”或“Fast Blue”的商品。TRAP则是抗酒石酸酸性磷酸酶染色，并非单一显色剂名称。部分TRAP试剂盒要求风干后直接观察，且不建议加盖玻片，因此也不宜统一写成“风干后盖片”[3]。

## 二、水性封片剂需要比较哪些特点？

选择适合AEC等醇敏显色体系的产品时，可以从配方基础、是否固化、是否需要封边和成像用途几个方面了解。甘油或甘油明胶配方、固化型水性封片剂和抗淬灭产品，描述的是不同产品特征，彼此并不一定互斥。

### 1. 甘油及甘油明胶类：关注封边要求

甘油及甘油明胶类介质是水性封片中的常见选择，部分方案需要对盖玻片边缘进行封边，以减少水分散失。选择时除了考虑操作习惯，还应查看产品的使用温度、封边要求及光学性质。不同配方的表现不同，不宜仅凭“甘油类”名称判断成像效果或保存时间。

### 2. 固化型水性封片剂：关注干燥条件

部分水性封片剂在干燥后可形成固定盖玻片的膜层，便于后续观察和操作。使用此类产品时，需要了解封片剂用量、温度和环境湿度对干燥时间的影响，以及产品是否需要额外封边。能够固化，并不等于已经获得长期保存所有显色信号的保证。

### 3. 抗淬灭产品：先看是否适合当前显色用途

抗淬灭配方主要服务于荧光成像需求。对于明场观察的AEC显色，优先确认产品明确支持的染色体系及复染组合，不能仅因带有“抗淬灭”字样，就判断其更适合保留AEC颜色。水性属性、固化方式与抗淬灭功能应分别了解。

## 三、Aqua-Poly/Mount用于水性封片，有哪些产品特点？

Polysciences Aqua-Poly/Mount是一种水性、非永久性封片介质，可直接从水相进行封片。原厂资料列有AEC、DAB和Fast Red等染色的使用信息，可作为了解商品化水性封片剂时的参考；实际使用仍需对应具体显色与复染组合[2]。

![商品化水性封片剂示例](https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12003223/5a65d3712cec474d6e6c308d60223bfa.jpg)

**图1：商品化水性封片剂示例。**

产品资料标示其折射率为**1.454–1.460，约为1.46**。原厂技术资料给出的干燥参考为约**24–48小时**；在其列举的室温实验室条件下（冬季相对湿度高于20%、夏季最高约50%），约24小时可在盖玻片下固化。实际所需时间受封片剂用量、温度和湿度影响，安排后续操作时应结合实际干燥状态判断[2]。

该产品干燥后可自行封闭盖玻片边缘，通常不需要再用指甲油或其他封边剂处理。原厂同时说明，4℃条件下干燥所需时间会延长，并要求不要通过加热切片来加速干燥[2]。这些信息有助于安排封片后的放置时间，也提醒使用者将产品自身的要求与实验室原有操作习惯对应起来。

## 四、从水相直接封片，如何处理残余液体和气泡？

使用适配AEC的水性封片方案时，显色及复染后的清洗应按照相应试剂说明完成。复染液和分化液也需要兼容AEC，避免在封片前通过含醇试剂引入信号损失。Mayer苏木素是常见的水性复染选择，其他复染剂则应检查具体配方[4]。

以Aqua-Poly/Mount为例，技术资料要求用去离子水漂洗后沥去多余水分，不建议吸干切片。操作时应在减少残余液体的同时保持组织区域湿润，再加入封片剂，缓慢盖上盖玻片，尽量减少夹带气泡[2]。

完成盖片后，按照产品要求放置并干燥。若盖玻片下出现气泡或边缘逐渐干涸，应结合封片剂类型检查盖片操作、实际干燥时间和封边要求。对于本身可形成封闭边缘的产品，无需再照搬其他水性封片方案中的额外封边步骤。

## 五、AEC切片可以保存多久？区分试剂储存与切片保存

AEC切片的保存表现与显色体系、复染组合、封片剂、光照及环境条件共同有关，没有一个适用于所有水性封片方案的统一时长。避光是需要关注的条件，但保存温度和其他要求应对应具体产品及染色方案。

还需要区分瓶装封片剂的储存条件、封片后的干燥条件和染色切片的保存条件。例如，Aqua-Poly/Mount产品页面标示的4℃储存要求针对产品本身；其技术资料另行说明了封片后的干燥方式。不能把瓶装试剂的储存温度直接推广为所有AEC切片的统一保存要求[2]。

如果研究需要较长时间后复核切片，应在选择显色体系时一并考虑保存需求，查看相应显色剂与封片剂组合的保存资料。Aqua-Poly/Mount被原厂定义为非永久性水性封片介质，其干燥成膜的特点不应被表述为永久保存AEC信号的承诺。

## 六、AEC与DAB双染，水性封片选择有什么不同？

在同时保留AEC红色与DAB棕色的常规双染流程中，应优先采用能兼容两种显色产物的水性路径。DAB能够耐受乙醇和二甲苯，并不能改变AEC对这些溶剂的敏感性。

因此，双染时需要把显色剂、复染剂和封片剂作为同一套流程考虑：先确认两种信号的保留条件，再检查复染与封片步骤是否满足要求。这样选择出的封片方案，才能与切片上实际使用的显色组合相匹配。

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## 常见问题（FAQ）

### 1. AEC染色应该选水性封片剂还是树脂封片剂？

常规AEC显色需要避免后续乙醇脱水和二甲苯透明，因此通常选择明确兼容AEC的水性封片剂。具体商品化显色配方如有专门要求，应按其说明执行。

### 2. Fast Red显色后都不能脱水吗？

需要看具体体系。Fast Red TR与Naphthol AS-MX phosphate组合形成的显色产物可溶于醇等有机溶剂，适合水性封片；其他商品化红色显色体系应分别核对，不能只依据“Fast Red”名称作统一判断。

### 3. Aqua-Poly/Mount封片后需要封边吗？

按原厂技术资料，该产品干燥后可自行封闭边缘，通常不需要额外封边。其他水性封片剂是否需要封边，应查看各自说明。

### 4. 水性封片剂多久可以固化？

不同产品不能使用同一个时间标准。Aqua-Poly/Mount技术资料给出的干燥参考为约24–48小时，具体受用量和环境条件影响；4℃下干燥会更慢，不应通过加热切片来加速。

### 5. 水性封片剂能否用于长期保存切片？

应查看具体产品及染色组合的保存资料。“水性”描述的是封片介质属性，不能单独代表保存期限；“能够固化”也不等于显色信号能够永久保持。

## 参考资料

[1] Dako. Immunohistochemical Staining Methods. 4th ed. 2006. Basic Enzymology：AEC、DAB、CN、Fast Red TR、Fast Blue BB及New Fuchsin相关内容。

[2] Polysciences. Aqua-Poly/Mount产品资料及Technical Data Sheet，TDS 521。

[3] Sigma-Aldrich. Acid Phosphatase (Leukocyte)，Procedure No. 387：干燥和盖片相关说明。

[4] Merck/Sigma-Aldrich. Immunohistochemistry Protocol：AEC复染与封片相关说明。

## 关于技术来源

> 本文依据免疫组化显色与封片相关技术资料、Polysciences产品说明，曼博生物整理，用于水性封片剂选择及组织切片观察相关科研参考。曼博生物提供[Aqua-Poly/Mount水性封片剂相关信息](https://www.mine-bio.com/poly_mount/)，具体操作和保存条件以所用产品说明为准。

摘要： 选择免疫组化封片剂时，需要先明确显色产物能否耐受乙醇脱水和二甲苯透明，再考虑固化、封边及保存要求。AEC和部分Fast Red显色体系适合采用水性封片，而DAB等显色体系可使用相应的脱水与树脂封片流程。本文结合常见显色体系的溶剂兼容性，以及Polysciences Aqua-Poly/Mount的产品资料，介绍水性封片剂的选择思路、固化条件和使用要点。

免疫组化水性封片剂怎么选？AEC、Fast Red显色与切片保存要点

选择免疫组化封片剂时，需要先明确显色产物能否耐受乙醇脱水和二甲苯透明，再考虑固化、封边及保存要求。AEC和部分Fast Red显色体系适合采用水性封片，而DAB等显色体系可使用相应的脱水与树脂封片流程。本文结合常见显色体系的溶剂兼容性，以及Polysciences Aqua-Poly/Mount的产品资料，介绍水性封片剂的选择思路、固化条件和使用要点。

应用科学家

其他

免疫组化封片剂选择需匹配显色体系：AEC等醇敏显色产物需用水性封片，DAB可常规脱水树脂封片。Polysciences Aqua-Poly/Mount水性介质适用于AEC、FastRed，折射率约1.46，24-48小时固化，干燥后自动封边无需额外处理。操作时从水相直接封片，避免含醇试剂，复染宜用Mayer苏木素。该产品为非永久性封片介质，保存时间受显色体系、光照等因素影响。

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