<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px; text-indent: 2em;">PBMC（外周血单个核细胞）是免疫研究、细胞治疗和药物开发的核心样本，精准、高效的 PBMC 制备是实验成功的第一步。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;">一、什么是 PBMC？为什么它如此重要？</span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">PBMC（Peripheral Blood Mononuclear Cells）即<strong>外周血单个核细胞</strong>，主要由淋巴细胞（T 细胞、B 细胞、NK 细胞）和单核细胞组成，是人体免疫系统的 &ldquo;核心部队&rdquo;。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>应用场景</strong>：免疫表型分析、细胞功能实验、CAR-T 细胞治疗、疫苗研发、肿瘤免疫研究等，几乎所有免疫相关研究都离不开高纯度、高活性的 PBMC。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>样本价值</strong>：PBMC 的状态直接影响实验结果，因此制备过程的规范性至关重要。</span></h2>
<p>&nbsp;</p>
<h2 class="" style="line-height: 2;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;"><img src="https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12034567/e8186c4f85b53299665bf0cc91a465b0.png" width="60%" height="auto" alt="" style="display: block; margin-left: auto; margin-right: auto;" /></span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;">二、PBMC 制备的核心原理：密度梯度离心</span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">传统 PBMC 制备的核心是<strong>Ficoll 密度梯度离心法</strong>，利用不同细胞的密度差异实现分层分离：</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">关键逻辑：Ficoll 分离液的密度（人源常用 1.077g/mL）介于单个核细胞（1.05-1.077g/mL）和粒细胞、红细胞（&gt;1.077g/mL）之间。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">离心后分层（从管底到上层）：</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">1,红细胞（1.09-1.11g/mL）</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">2,粒细胞（1.08-1.095g/mL）</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">3,Ficoll 分离液</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">4,PBMC（白膜层，淋巴细胞 + 单核细胞）</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">5,血小板（1.03-1.06g/mL）</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">6,血浆</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">其中，中间薄薄的云雾状 &ldquo;白膜层&rdquo; 就是我们需要的 PBMC，需小心吸取以避免污染。</span></h2>
<p>&nbsp;</p>
<h2 class="" style="line-height: 2;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;"><img src="https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12034567/5772fd670611304e55feaad0869b104b.png" width="60%" height="auto" alt="" style="display: block; margin-left: auto; margin-right: auto;" /></span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;">三、PBMC 制备标准流程（Ficoll 密度梯度离心法）</span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>1,样本预处理</strong>：获取 EDTA 或肝素抗凝的全血，用 PBS/HBSS 按 1:2-1:4 比例稀释，降低血液粘稠度，避免分层不清。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>2,分层铺样</strong>：按照<strong>样本：Ficoll 体积比 4:3</strong>（或高度比 3:2.4），先在离心管底部加入 Ficoll，再沿管壁缓慢加入稀释后的血液，避免混合破坏密度梯度。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>3,离心条件</strong>：20℃、400xg 离心 30-40 分钟，升降温速率设为缓慢，防止密度梯度波动。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>4,收集与洗涤</strong>：用移液管小心吸取白膜层，转移至新离心管，用 PBS 洗涤 2-3 次，去除残留 Ficoll 和血小板，最终得到纯净 PBMC。</span></h2>
<p>&nbsp;</p>
<h2 class="" style="line-height: 2;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;"><img src="https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12034567/e6cbc619e00dbaeb7ff805b4a882a6b0.png" width="60%" height="auto" alt="" style="display: block; margin-left: auto; margin-right: auto;" /></span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;">四、Ficoll 使用的关键注意事项</span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>1,种属适配</strong>：</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">人外周血、脐带血、骨髓：1.077g/mL Ficoll</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">大鼠、小鼠血液 / 骨髓：1.084g/mL Ficoll</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">人低密度细胞（如间充质干细胞）：1.073g/mL Ficoll</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>保存条件</strong>：避光储存于 4-30℃，有效期 3 年；开封后建议 4-8℃保存，避免反复冻融，冷冻后需充分混匀再使用。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>温度控制</strong>：分离全程保持 18-22℃，温度过高会降低 Ficoll 密度，导致 PBMC 穿透到下层；温度过低会使红细胞聚集差，造成污染。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>操作细节</strong>：铺样时避免混合，离心后立即收集，防止细胞层扩散；大体积样本可通过增加离心管直径处理，不影响分离效率。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;">五、Miltenyi：更高效的 PBMC 制备方案</span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">传统 Ficoll 法虽经典，但存在步骤繁琐、细胞损失大等问题。Miltenyi 提供了创新解决方案：</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>全血直接分选</strong>：使用 Miltenyi 全血磁珠，无需密度梯度离心，直接从全血中分离 PBMC，省略裂红、离心步骤，减少细胞损失，提升活性。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>自动化制备</strong>：搭配 MACS 分选仪，实现高通量、标准化 PBMC 制备，避免人为误差，提升实验重复性。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;"><strong>质控优化</strong>：Miltenyi Ficoll 产品经过严格质控，密度精准、批次稳定，保证 PBMC 得率和活性。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">优宁维作为 Miltenyi 官方授权供应商，提供全系列 PBMC 制备试剂、耗材和设备，同时提供专业技术支持，帮你优化实验方案。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;">PBMC 制备常见问题（FAQ）</span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">1. Ficoll 可用于哪些种属的细胞分离？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">Ficoll 主要用于人外周血、脐带血、骨髓的 PBMC 分离；大鼠、小鼠等种属需使用 1.084g/mL 的 Ficoll；其他组织或低密度细胞需选择对应密度的 Ficoll 并优化条件。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">2. Ficoll 的保存条件是什么？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">Ficoll 应避光储存于 4-30℃，有效期 3 年；开封后建议 4-8℃保存，避免反复冻融，冷冻后需充分倒置混匀。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">3. 离心后 PBMC 在哪个位置？各层分别是什么细胞？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">从管底到上层依次为：红细胞&rarr;粒细胞&rarr;Ficoll 分离液&rarr;PBMC（白膜层）&rarr;血小板&rarr;血浆。收集时需先移除上层血浆，再小心吸取白膜层。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">4. 血液样本和 Ficoll 的比例是多少？大体积样本如何处理？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">推荐样本与 Ficoll 的<strong>体积比为 4:3</strong>（或高度比 3:2.4）；大体积样本可通过增加离心管直径处理，不影响分离效果。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">5. PBMC 得率低且活性差，是什么原因？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">主要原因是分离温度过高（&gt;22℃），导致 Ficoll 密度降低，PBMC 穿透到下层。需将温度控制在 18-22℃，并缩短操作时间。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">6. 分离后 PBMC 有较多红细胞污染，怎么办？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">原因 1：温度过低（&lt;18℃），Ficoll 密度升高，红细胞聚集差；原因 2：离心力不足或时间过短。需调整温度至 18-20℃，并保证 400xg 离心 30-40 分钟。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">7. PBMC 得率低且伴有粒细胞污染，如何解决？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">通常是离心机不稳定导致密度梯度波动。需检查离心机配平，缓慢升降速，避免破坏密度梯度。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">8. 除了 Ficoll 法，还有更高效的 PBMC 制备方法吗？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">Miltenyi 全血磁珠分选技术可直接从全血中分离 PBMC，无需密度梯度离心，步骤更简单，细胞活性更高；搭配自动化分选仪，适合大规模实验。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><strong><span style="font-size: 14px;">9. 哪里可以购买 Miltenyi PBMC 制备相关产品？</span></strong></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">优宁维官网提供 Miltenyi 全系列 PBMC 制备试剂、耗材和设备，正品保障、现货供应，同时提供专业技术支持。</span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="color: #e03e2d;"><strong><span style="font-size: 14px;">总结</span></strong></span></h2>
<h2 class="" style="line-height: 2; text-indent: 2em;"><span style="font-size: 14px;">PBMC 制备是免疫研究的基础环节，传统 Ficoll 法需严格控制操作细节，而 Miltenyi 的全血分选和自动化方案大幅提升了制备效率和质量。优宁维作为 Miltenyi 授权供应商，持续为科研工作者提供优质的 PBMC 制备产品与一站式服务，助力免疫研究高效推进。</span></h2>
<p>&nbsp;</p>
<table width="100%" border="1" cellpadding="3" cellspacing="2" style="border-collapse: collapse; width: 100%; border-color: #ced4d9; border-style: solid; margin-left: auto; margin-right: auto;">
<tbody>
<tr style="height: 30px; background-color: #ced4d9;">
<td style="width: 32.1953%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">名称</span></td>
<td style="width: 15.2031%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">货号</span></td>
<td style="width: 24.9843%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">规格</span></td>
</tr>
<tr style="height: 30px;">
<td style="width: 32.1953%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">StraightFrom Buffy Coat PBMC Isolation Kit (LS), human </span></td>
<td height="21" class="xl65" width="87" style="height: 16pt; width: 15.2031%; text-align: center;"><span style="text-decoration: underline; color: #3598db; font-size: 12px;"><a href="https://www.univ-bio.com/straightfrom-buffy-coat/130-126-453.html?mk_channel=seo" style="color: #3598db; text-decoration: underline;"> 130-126-453</a></span></td>
<td style="width: 24.9843%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">for 2 buffy coats</span></td>
</tr>
<tr style="height: 30px;">
<td style="width: 32.1953%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">PBMC Isolation Kit, human </span></td>
<td height="21" class="xl65" style="height: 16pt; width: 15.2031%; text-align: center;"><span style="text-decoration: underline; color: #3598db; font-size: 12px;"><a href="https://www.univ-bio.com/pbmc-isolation-kit/130-115-169.html?mk_channel=seo" target="_parent" style="color: #3598db; text-decoration: underline;"> 130-115-169</a></span></td>
<td style="width: 24.9843%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">for 10&times;8ml whole blood </span></td>
</tr>
<tr style="height: 30px;">
<td style="width: 32.1953%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">StraightFrom&reg; Whole Blood PBMC Isolation Kit, human </span></td>
<td height="21" class="xl65" style="height: 16pt; width: 15.2031%; text-align: center;"><span style="text-decoration: underline; color: #3598db; font-size: 12px;"><a href="https://www.univ-bio.com/straightfrom-whole-blood/130-126-359.html?mk_channel=seo" target="_parent" style="color: #3598db; text-decoration: underline;"> 130-126-359</a></span></td>
<td style="width: 24.9843%; text-align: center;"><span style="font-size: 12px;">for 500ml whole blood </span></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p style="line-height: 2;">&nbsp;</p>

PBMC 制备全攻略：原理、流程

PBMC（Peripheral Blood Mononuclear Cells）即外周血单个核细胞，主要由淋巴细胞（T 细胞、B 细胞、NK 细胞）和单核细胞组成，是人体免疫系统的 “核心部队”。

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PBMC（外周血单个核细胞）是免疫研究的关键样本，Ficoll密度梯度离心法可高效分离淋巴细胞和单核细胞。文章详解PBMC制备标准流程、Ficoll使用注意事项及Miltenyi创新解决方案，帮助提升细胞得率和活性，为免疫治疗、疫苗研发等提供优质样本。

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