## ■ 1. 背景介绍

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▲RU.521 (T5486)，CAS: 2262452-06-0的化学结构式

RU.521 (T5486)，CAS: 2262452-06-0 是一种选择性环状 GMP-AMP 合成酶（cGAS）小分子抑制剂，靶向由双链 DNA（dsDNA）激活的细胞质受体并启动I型干扰素信号。其对小鼠 cGAS 的生化抑制活性为 IC50=0.11 μM，对人源 cGAS 的 IC50=2.94 μM；在细胞水平的 dsDNA 激活受体检测中，IC50 为 700 nM。RU.521 通过抑制 cGAS 的催化功能，阻断其以 ATP 和 GTP 合成第二信使 2′3′-cGAMP；在正常情况下，2′3′-cGAMP 结合并激活适配蛋白 STING，进而促使 TBK1、IRF3 激活并诱导 I 型干扰素及干扰素刺激基因（ISG）转录上调[1,2]。与该机制一致，RU.521 抑制 cGAS 介导的干扰素上调，并能降低 Aicardi–Goutières 综合征小鼠模型来源巨噬细胞中的固有干扰素表达，表明其可有效调节 cGAS 驱动的基础及诱导性信号输出。

在 cGAS–STING 通路中，cGAS 充当 dsDNA 传感器和催化枢纽，将核酸刺激转化为可扩散的第二信使；STING 位于内质网，结合 2′3′-cGAMP 后发生寡聚并招募 TBK1 磷酸化 IRF3，最终诱导干扰素基因转录[1,2]。RU.521 作用于最上游的酶促步骤，直接抑制 cGAS 活性，从而降低细胞内 2′3′-cGAMP 水平，功能性地将 dsDNA 检测与下游 STING 激活脱耦。因而在存在 RU.521 的条件下，无论是转染、病原来源 DNA，还是内源性 DNA 泄漏导致的细胞质 DNA 刺激，其 TBK1/IRF3 信号与干扰素/ISG 转录均会被削弱。

这些特性使 RU.521 成为解析先天免疫 DNA 识别中 cGAS 贡献的实用工具化合物。其物种选择性（小鼠 IC50 0.11 μM；人源 IC50 2.94 μM）有利于跨物种药理比较并指导实验剂量设置。在原代免疫细胞与工程化细胞中，RU.521 可用于：（i）急性检验 dsDNA 触发的转录程序是否依赖 cGAS；（ii）降低核酸递送、基因编辑或线粒体 DNA 泄漏研究中干扰素背景噪音；（iii）与遗传干预对照，通过监测 cGAMP 含量、IRF3/TBK1 磷酸化及干扰素/ISG 表达来标定靶点占有与通路输出。其在 Aicardi–Goutières 模型巨噬细胞中下调固有干扰素的能力，亦支持其在干扰素病理研究中用于界定 cGAS 依赖的基础信号并描绘慢性 DNA 感知背景下的网络互作[1,2]。

## ■ 2. 文献分享

### ■ 2.1 CypD Dependent mPTP Opening Is Crucial for Oxidized Mitochondrial DNA Release in Ferroptosis

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▲亲环蛋白 D（CypD）调控铁死亡进程中线粒体形态、脂质过氧化与钙稳态 (A) 透射电镜观察铁死亡诱导剂 RSL3、erastin 处理后 NCI-H1299 细胞的线粒体超微结构； (B) 铁死亡诱导剂处理后线粒体面积、周长及长短轴比的定量统计； (C、D) 共聚焦荧光染色显示 erastin（5 μM）、RSL3（0.5 μM）时间梯度处理下钙黄绿素（Calcein）与线粒体示踪剂（MitoTracker）的定位变化，离子霉素为阳性对照； (E、F) 对应组别中线粒体与胞质钙黄绿素荧光强度比值的定量分析； (G) 环孢素 A（CsA）预处理对 erastin 诱导细胞活力下降的影响； (H、I) C11-BODIPY 流式检测及定量结果，验证 CsA 对 erastin 诱导脂质过氧化的调控作用； (J) CypD 敲低后 erastin 诱导的细胞活力变化曲线； (K、L) CypD 敲低对 erastin 诱导脂质过氧化水平的影响及定量统计； (M) CypD 敲除及回补细胞经 erastin 处理后的细胞活力曲线； (N) 透射电镜观察 CypD 敲除及回补细胞经 erastin 处理后的线粒体形态； (O) 共聚焦染色观察 CypD 敲除及回补细胞中 erastin 诱导的线粒体钙稳态改变； (P) 各组线粒体与胞质钙黄绿素荧光强度比值的定量统计。

RU.521 (T5486) 在本研究中作为cGAS抑制剂使用，被报道可显著抑制由RSL3或erastin诱导的铁死亡。作者利用RU.521检验cGAS–STING通路在铁死亡中的作用，结果显示在上述化学诱导条件下，RU.521显著降低了铁死亡反应。此外，研究在NCI-H1299细胞中进行了RSL3的剂量反应实验，并在存在RU.521（10 μM，6小时）的条件下，采用FerroOrange通过流式细胞术检测游离铁水平，并对平均荧光强度进行了定量分析。这些结果表明，RU.521通过抑制cGAS在所用细胞模型中抑制了化学诱导的铁死亡，并被用于评估铁死亡应激下游离铁动态的实验设置中。[3]

### ■ 2.2 Lovastatin-Induced Mitochondrial Oxidative Stress Leads to the Release of mtDNA to Promote Apoptosis by Activating cGAS-STING Pathway in Human Colorectal Cancer Cells

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▲洛伐他汀对线粒体膜电位、呼吸功能及线粒体 DNA 的调控作用 (A) 流式直方图显示不同浓度洛伐他汀（Lov）处理后细胞的 TMRE 荧光分布，CCCP 为线粒体去极化阳性对照； (B) 各组 TMRE 平均荧光强度的倍数变化定量，洛伐他汀呈浓度依赖性降低线粒体膜电位； (C) 氧消耗速率（OCR）动态检测曲线，依次加入寡霉素、FCCP、抗霉素 A 与鱼藤酮，解析基础呼吸、最大呼吸等线粒体功能参数； (D) 各组线粒体 DNA（mtDNA）相对完整性检测，H₂O₂为 DNA 损伤阳性对照； (E) 各组细胞相对 mtDNA 含量的定量统计。

本研究将RU.521 (T5486)作为cGAS的药理学抑制剂来检验通路参与情况。在人结直肠癌HCT116细胞中，研究者先以1.0 μM RU.521预处理2小时，随后给予洛伐他汀24小时，并通过qPCR检测IFNB1、IFIT3、ISG15与IFIT1的表达。结果显示，RU.521阻断了洛伐他汀诱导的上述I型干扰素相关基因的表达上调。文中明确指出RU.521为cGAS抑制剂，在上述实验条件下，其应用有效地阻止了IFNB1、IFIT3、ISG15和IFIT1的转录激活。[4]

### ■ 2.3 Neutrophil Extracellular Traps Regulate Surgical Brain Injury by Activating the cGAS-STING Pathway

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▲胞外 DNA 经 STING 通路介导脑损伤后的神经炎症与神经元损伤 (A~C) SBI 术后 1 d 血浆中 IFN-β、瓜氨酸化组蛋白 H3（CitH3）及髓过氧化物酶 - DNA 复合物（MPO-DNA）的浓度检测，DNase I 处理可显著降低血浆 IFN-β 水平，对 CitH3 与 MPO-DNA 水平无显著影响。 (D~F) Western blot 检测 SBI 术后 3 d 脑组织中 STING、磷酸化 TBK1（p-TBK1）的蛋白表达及定量分析，DNase I 可抑制 STING 通路激活，补充 STING 激动剂 cGAMP 可逆转该抑制效应。 (G~I) 脑组织 Iba-1 免疫荧光染色、小胶质细胞阳性比例定量及脑组织炎症因子检测，显示 cGAMP 处理可促进小胶质细胞活化，上调 IL-6、TNF 等促炎因子的表达水平。 (J~K) 脑组织 NeuN/TUNEL 共定位荧光染色及凋亡神经元比例定量，验证激活 STING 通路可加重 SBI 诱导的神经元凋亡。 (L) SBI 术后 3 d 脑组织含水量检测，用于评估脑水肿程度。 (M) 术后 1 d、3 d、7 d 的改良 Garcia（mGarcia）神经功能评分，评估 STING 通路抑制（RU.521）、DNase I 降解胞外 DNA 及 cGAMP 回补对 SBI 后神经功能恢复的影响。

RU.521 (T5486) 在外科性脑损伤大鼠模型中作为cGAS的特异性抑制剂使用。研究显示，RU.521在损伤后1天显著降低了血浆干扰素-β水平。在损伤后3天的脑组织检测中，RU.521明显降低了促炎细胞因子白细胞介素-6与肿瘤坏死因子。与此同时，RU.521显著抑制了神经元细胞死亡，并在损伤后3天与7天减轻了神经功能障碍。这些结果表明，在该研究条件下，RU.521抑制cGAS相关活性，并与系统性干扰素信号的降低、脑内炎性细胞因子的减少、神经元死亡的下降以及神经功能改善相联系。[5]

### ■ 2.4 Chemotherapy-induced senescent nasopharyngeal carcinoma cells suppress NK cell-mediated antitumor immunity by upregulating EBI3 via mtDNA-cGAS-STING pathway

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▲硒诱导鼻咽癌细胞衰老及激活衰老相关分泌表型的体内外验证 (A, B) 临床患者治疗前后肿瘤组织中 p16、p21 的免疫组化染色及免疫反应评分（IRS）统计，治疗后衰老标志物 p16、p21 的表达水平显著升高。 (C, D) HK1 与 HONE1 细胞经硒（Se）处理后的衰老相关 β- 半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色及阳性细胞比例定量，证实硒可显著诱导肿瘤细胞发生衰老。 (E, F) 流式细胞术检测 β- 半乳糖苷酶平均荧光强度（MFI），衰老清除剂 ABT263 可有效逆转硒诱导的细胞衰老表型。 (G, H) PI 染色流式细胞周期分析及定量统计，硒处理可诱导鼻咽癌细胞发生 G2/M 期细胞周期阻滞。 (I, J) Western blot 与 qPCR 检测衰老相关分子的蛋白与 mRNA 表达，硒处理显著上调 p53、p21、p16 及 DNA 损伤标志物 γH2AX 的表达水平。 (K) qPCR 检测衰老相关分泌表型（SASP）因子的 mRNA 水平，硒处理可广泛上调炎症因子、趋化因子及基质金属蛋白酶等多种 SASP 组分的表达。 (L~N) 裸鼠皮下成瘤实验设计及肿瘤组织检测结果，体内硒给药可显著上调肿瘤组织中 p16、p21 的阳性比例及衰老相关基因的 mRNA 表达。

RU.521 (T5486) 被明确为一种cGAS抑制剂，并用于研究顺铂诱导鼻咽癌细胞衰老过程中cGAS-STING通路的作用。在顺铂诱导的衰老细胞中，RU.521降低了SA-β-Gal阳性细胞的比例，并减弱了p53、p21与p16等衰老相关标志物的上调，这些结果基于流式法SA-β-Gal检测与RT-qPCR评估所得。研究还在施用RU.521后，利用激光共聚焦显微镜检测NF-κB p65的核转位；同时通过RT-qPCR检测EBI3的mRNA水平，并以双荧光素酶实验评估EBI3启动子活性。上述实验在经顺铂处理以诱导衰老状态的鼻咽癌细胞模型中开展，RU.521的应用用于探究与cGAS-STING信号及EBI3转录调控相关的下游读数。总体而言，证据表明RU.521在该条件下减轻了典型的细胞衰老表型。[6]

### ■ 2.5 A STING signaling relay from tumor cells to macrophages mediates the improved efficacy of combination chemotherapy in pancreatic cancer

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RU.521 (T5486) 在本文中被明确界定为特异性的 cGAS 抑制剂。研究的细胞培养方法部分列出了所用多种化合物的工作浓度，并将 RU.521 标注为“特异性 cGAS 抑制剂”，同时给出了其在体外实验中的使用浓度为 10 μM。文中还提供了 RU.521 的采购信息，而其功能属性通过该标注得到明确界定。依据这些方法学描述，可以确认研究者在体外体系中以 10 μM 的剂量使用 RU.521，并以其作为特异性抑制 cGAS 的试剂参与相关实验。[7]

## ■ 3. 结语

RU.521是一种选择性抑制环状GMP-AMP合成酶（cGAS）的小分子，通过阻断cGAS催化ATP和GTP合成第二信使2′3′-cGAMP的过程，阻断细胞质双链DNA的感知信号传递，进而减少STING的激活，抑制TBK1/IRF3磷酸化及I型干扰素和干扰素刺激基因的转录上调。文献显示，RU.521在多种模型中有效抑制cGAS依赖的信号通路，包括抑制铁死亡、调控线粒体DNA诱导的细胞凋亡、减轻脑损伤相关神经炎症与神经元死亡、缓解化疗诱导的细胞衰老，以及促进胰腺癌联合化疗疗效。这些研究证实RU.521作为解析cGAS相关先天免疫通路的有力药理学工具。未来，可进一步探索其在干扰素相关疾病、炎症性疾病、癌症免疫调节中的治疗应用潜力，并用于优化核酸递送及基因编辑等实验系统，降低干扰素背景信号干扰。

## ■ 4. Q&A

Q1: RU.521的主要靶点及作用机制是什么？

A1: RU.521选择性抑制环状GMP-AMP合成酶（cGAS），通过阻断其催化ATP和GTP合成第二信使2′3′-cGAMP的功能，阻止细胞质双链DNA信号传导，进而抑制下游STING激活和I型干扰素信号通路。

Q2: 文献中RU.521在研究中是如何应用的？

A2: RU.521被用来抑制多种模型中的cGAS依赖信号，包括抑制化学诱导的铁死亡，阻断洛伐他汀诱导的结直肠癌细胞干扰素相关基因表达，减轻外科脑损伤炎症及神经元死亡，缓解顺铂诱导的鼻咽癌细胞衰老，以及作为胰腺癌联合化疗研究中的特异性cGAS抑制剂。

Q3: RU.521在实验设计和药理学研究中具有什么优势？

A3: RU.521对小鼠cGAS的抑制效力（IC50=0.11 μM）明显优于人源cGAS（IC50=2.94 μM），利于跨物种药理学比较。它可用于急性检测dsDNA诱导的转录依赖性，降低核酸递送或线粒体DNA泄漏研究中的干扰素背景信号，并通过监测cGAMP含量及下游磷酸化指标辅助靶点验证与信号通路分析。

## ■ 5. 参考文献

[1] Sun L, Wu J, et al. Cyclic GMP-AMP synthase is a cytosolic DNA sensor that activates the type I interferon pathway. Science. 2013;339(6121):786-791.

[2] Chen Q, Sun L, et al. Regulation and function of the cGAS-STING pathway of cytosolic DNA sensing. Nat Immunol. 2016;17(10):1142-1149.

[3] Zhou H, Fu W, Liu S, Zhang Z, Luo H, Zhong Q. CypD Dependent mPTP Opening Is Crucial for Oxidized Mitochondrial DNA Release in Ferroptosis. Advanced Science. 2026;13(20):.

[4] Huang X, Liang N, Zhang F, Lin W, Ma W. Lovastatin-Induced Mitochondrial Oxidative Stress Leads to the Release of mtDNA to Promote Apoptosis by Activating cGAS-STING Pathway in Human Colorectal Cancer Cells. Antioxidants. 2024;13(6):679.

[5] Li B, Xu L, Wang Z, Shi Q, Cui Y, Fan W, et al.. Neutrophil Extracellular Traps Regulate Surgical Brain Injury by Activating the cGAS-STING Pathway. Cellular and Molecular Neurobiology. 2024;44(1):.

[6] Liang L, Liu S, Li Y, Zeng F, He Q, Wang Z, et al.. Chemotherapy-induced senescent nasopharyngeal carcinoma cells suppress NK cell-mediated antitumor immunity by upregulating EBI3 via mtDNA-cGAS-STING pathway. Cell Communication and Signaling. 2026;24(1):.

[7] Ding H, Mao Y, Yao Z, Xing K, Yang Q, Wang R, et al.. A STING signaling relay from tumor cells to macrophages mediates the improved efficacy of combination chemotherapy in pancreatic cancer. Journal of Biomedical Science. 2026;33(1):.

■1.背景介绍▲RU.521(T5486)，CAS:2262452-06-0的化学结构式RU.521(T5486)，CA

■ 【TargetMol 明星分子】- RU.521: 靶向cGAS，精准调控先天免疫DNA感知通路的利器

■1.背景介绍▲RU.521(T5486)，CAS:2262452-06-0的化学结构式RU.521(T5486)，CAS:2262452-06-0是一种选择性环状GMP-AMP合成酶（cGAS）小分子抑制剂，靶向由双链DNA（dsDNA）激活的细胞质受体并启动I型干扰素信号。其对小鼠cGAS的生化抑制活性为IC50=0.11μM，对人源cGAS的IC50=2.94μM；在细胞

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RU.521（T5486）是选择性cGAS小分子抑制剂，通过阻断2′3′-cGAMP合成抑制STING通路及I型干扰素信号。文献证实其在铁死亡、线粒体DNA诱导凋亡、脑损伤炎症、化疗诱导衰老及胰腺癌化疗增敏等模型中有效，是解析cGAS通路功能的强效工具化合物。

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