MCE铁死亡研究指南：机制、标志物与检测工具（回放）原创

嗯，各位老师同学们，大家晚上好，我是来自MC的生物技术支持。然后，今天给大家分享的主题是铁死王相关的一些干货，比如铁死亡有哪些经典的这个机制，信号通路，然后工具化合物的应用，还有一些铁死亡的标志物介绍，以及嗯，给大家给大家推荐的一些检测工具。嗯，我们先看一下铁死亡是什么。嗯，从这张图可以看到，铁死亡它其实算是程序性细胞死亡方式的一种。那程序性细胞死亡方式。等一下，我把激光打开，没有激光。那算了，就这样吧。嗯，程序性细胞死亡方式，它从最开始的这个细胞自噬，然后到1972年发现的细胞凋亡，还有到后面发现的凋亡，以及2012年发现的铁死亡，然后2022年发现的这个铜死亡，它都算是程序性细胞死亡方式的一种。那它们具有不同的形态以及生化特征。

嗯，铁死亡最初是怎么发现的呢？在2012年的时候，嗯，美国哥伦比亚大学的学者，他发现在发现化合物伊拉斯汀在杀死杀死rus突变细胞的时候，这种细胞死亡方式与其他的这个程序性细胞死亡都不太一样，而且这种细胞死亡可以被铁螯合剂。有效的抑制，所以当时把这种铁依赖性的细胞死亡方式命名为铁死亡。那铁死亡有哪些特征呢？最主要的特征是细胞内铁代谢的异常导致的脂质过氧化，然后细胞膜会破裂死亡与凋亡坏死这些常见的神经细胞死亡方式不同，铁死亡它依赖于铁离子的一个含量以及脂质过氧化的一个发生。

然后，铁死亡它和疾病的关联性的话，表现在嗯，这张图可以大家可以看一下，包括这个神经系统的疾病，比如阿兹海默症、帕金森，然后心血管的一些疾病，还有嗯，像胰腺呀，肾脏肝脏都是有一些关联的。嗯，具体的应用，比如说某一些铁死亡诱导剂，它可能在文献中是可以用于消除癌细胞、炎性细胞这些病变的细胞，或者说可以和化疗或者放射疗法连用。那铁死亡抑制剂，它可能在一些神经退行性疾病或者心血管疾病中，会显示出一个保护作用。所以，你如果抑制铁死亡的话，就可以减轻病理过程带来的这种细胞损伤或者功能丧失。

因此像这些铁死亡诱导剂、抑制剂，它可以为大家对于疾病的研究或者说治疗提供一些新的方向吧。下面我们来对比一下不同的全球性细胞死亡有什么异同点。首先，我们看一下铁死亡和铜死亡同样是跟金属离子相关，它们有什么异同点？我们可以从形态以及嗯生化特征，还有主要相关的一些信号通路以及关键基因来进行比较。铁死亡的话，它主要表现在这个线粒体的收缩，还有线粒体膜密度会增加，以及线粒体几会减少，甚至是消失。嗯，细胞膜会破裂。然后同死亡的话，它也会有线粒体的收缩，细胞膜破裂，然后它还会有内质网的损伤以及染色质的破裂。生化特征的话，铁死亡主要是细胞内亚铁离子的积累。

还有一个脂质过氧化，然后还会有一些脂质过氧化的副产物，比如MDA或者活性氧含量会升高。然后细胞内的这个抗氧化成分G、CH会下降。铜死亡的话，他也会有氧化应激线粒体功能的障碍。除此之外，还有铜离子水平增加，只显化蛋白的聚集。那相关的信号通路，在铁死亡过程中主要发挥通，呃，主要发挥主要作用的这个通路是XCG PX four, 还有铁代谢，脂代谢一些途径，还有甲醛戊酸途径。然后同死亡的过程中，会有这个DT的一句话啊，铁硫蛋，铁硫粗蛋白受阻，介导的这个铜死亡。嗯，在铁死亡过程中发现发生的一些关键基因蛋白的变化是GPX four s, LC 7A11, 还有转铁蛋白，还有一些脂代谢相关的酶，比如呃，AC SL 4a ox系列。

那同死亡中，它关键基因是FDXE dlalias.好的。下面还有一些大家可能更为熟悉的成性细胞死亡方式之间的一个嗯，异同点的汇总，比如自噬，然后凋亡、坏死性凋亡，还有凋亡之间的一个比较。那这个就简单说一下，比如自噬，它有主要特征是这个双膜自噬体的形成，然后生化特征是溶酶体活性的增加。主要通路就是m topp one这样的通路，然后关键基因像ATG5、ATG 7、LC 3嗯，都是比较经典的姿势指标。凋亡的话，它会体现在一个细胞皱缩啊，染色质凝集，还有这个细胞核的碎裂，以及最明显的这个凋亡小体的形成。

然后，生化特征表现在于DNA的一个片段化，还有这个case space嗯，经验反应的这个激活。然后，主要通路的话，包括死亡受体介导的这种外源性通路，还有线粒体介导的内源性通路，还有这个穿孔素的通路都可以去介导细胞凋亡。然后，发生关键发生变化的一些关键基因主要是kiss paint家族，还有bc two家族以及死亡受体。嗯，坏死性凋亡的话，它主要表现在细胞膜的一个破裂，然后细胞成分会溢出，细胞质和细胞器会发生肿胀。然后，生化特征表现在ATP水平的下降，主要通路的话就是这个TF、re相关通路，还有这个IP1和3的这个通路。然后，发生变化的这个主要基因就是IP1和IP3。嗯，对于细胞交往而言的话，形态上面会有一个细胞肿胀、细胞膜的破裂，以及凋亡小体的形成。

嗯，生化特征包括gas家族、kiss家族，这个表达水平都会增加，然后还有白介素等细胞因子的释放。主要通路的话就是case space 1介导的这个经典通路，还有一些其他case space蛋白介导的非经典图，嗯，介导交，介导交往的这个启动因子是case space一三四五十一，还有这个执行因子，Guess me, 家族的蛋白。喝口水。啊。嗯，下面我们可以看一下。更为具体的一个程序性细胞死亡的一个比较，嗯，第一张图是一个透射电镜的图，这个是一个铁死亡的实验。然后B图的话，它是没有经过任何处理的。然后C图是伊拉斯汀诱导的，我们可以很明显的看到伊拉斯汀，它作为一个铁死亡诱导剂去诱导细胞发生铁死亡后，这个细胞核以及细胞质，它相对于空白对照组来说，会变得更加的电子透明。

然后，我们再看这个线粒体的变化，像F图是一个正常的正常细胞的一个线粒体，它完全具备这个正常线粒体的形态。然后，G图是伊拉斯汀处理之后的，可以看到这些线粒体就明显收缩了，然后里面这个内部的这个脊也被破坏了。同时，细胞膜呃线粒体膜上这个。电子密度也会变得更高。还有另外一个就是这个细胞膜的变化，地图可以看到它这个细胞膜的完整性是会受到破坏的。下面这个是一个扫描电镜图。嗯，这个的话，就主要给大家看一下细胞凋亡，然后凋亡以及坏死性凋亡之间的一个差异。可以看到，凋亡它会有一个细胞的肿胀，而且会有这种气泡气泡状的凸起，以及膜上会有很多膜孔。对于凋亡的话，可以最明显的看到的就是这个细胞膜表面凋亡小体的一个形成，同时还有这个细胞膜的收缩。

但它这个细胞膜的完整性是比较好的，内部其实还有这个细胞核的一个碎裂。然后，对于坏死性凋亡而言，细胞会变得比较圆，然后细胞肿胀，但是没有气泡，而且具有这个核的完整性。从这个电竞的图，其实大家就可以非常直观的嗯感受一下不同的这个程序性细胞死亡，它在形态上的一个差异。嗯，那我们讲完这个铁死亡以及其他的这个成型细胞死亡方式之后，我们再来看一下调控铁死亡的一些经典的机制，清华通路有哪一些。

第一条，如果是研究铁死亡的人，应该大家都非常熟悉，就是经典的这个XCGHG，PX four的这条途径，它是一条抑制铁死亡的途径，那这条途径它有三个关非。NAD PH酶这样的酶给它还原成GSH，然后GSH它又可以被旁边这个g g PX four氧化酶给氧化成GSSG。那在gpx four的这个催化循环过程中，嗯g PX four它是一个核心的一个下游抗氧化剂嘛，然后它的主要活性中心是这个烯醇。当你的细胞内如果发生铁死亡，比如说铁离铁离子通过分的反应产生这种。P oh, 就是脂质过氧化，脂质过氧化的产物，嗯，磷脂氢过氧化物，嗯，磷脂氢过氧化物，它会把这个烯醇还原成烯酸，同时这个嗯，脂质氢过氧化物会被会被还原成这个脂质醇。

这个时候，铁死亡就可以受到一个抑制了，因为你抑制了它的这个脂质过氧化。然后，G GPS four的话，你如果这个活性基团被氧化成烯酸之后，它又可以参与这个JCH的一个循环。所以在这条通路中，它通过认为是这个氧化还原的稳态，可以去抑制脂质过氧化，然后抑制铁死亡的发生。所以这个是一条，这个是一条非常经典的，嗯抑制直接转化的一个抑制铁死亡的一个信号通路。然后的话，嗯，刚刚这条信号通路上，如果大家想进行调控，比如说你想抑制这条通路，给大家推荐嗯，几个非常经典的化合物吧。一个是很多人会去一直上游的这个X，就是a 11 A2这个组合蛋白，然后经典的化合物是伊拉斯汀。

然后还有下游这个，如果是想抑制下游的这个g PX four, 然后比较经典的化合物是S13和MML 210这两个化合物。那我们MC的化合物除了从化学方面，比如说通过纯度结构进行质检，保证这个产品质量，我们还进行了一个非常经典的铁死亡的一个实验验证。我们选用的是1080这个铁死亡敏感的细胞，然后嗯去验证了这个伊拉斯汀和艾S3对于这个铁死亡的诱导作用。我们的检测指标的话，一个是细胞活力，可以看到两个两个化物都可以非常明显的诱导细胞活力的下降。然后，如果我加了这个F12-1，就是一个非常经典的。嗯，脂质过氧化的一个抑制剂可以抑制铁死亡这个细胞活力会有所恢复。然后我们还检测了嗯，这个蛋白的标志物，我们选用的标标志物是g PX four, 然后可以看到两个化合物都可以嗯，显著的抑制这个g PX four的表达。嗯，那在我们这个实验中用到的这些化合物啊，还有WB用到的这些抗体，嗯，都是我们MC自己加的，如果大家正好在做这个实验，有需求的话，可以联系我们，也可以留下您的联系方式，然后我们会有销售跟进您的需求。

嗯，在这在这里顺便给大家分享一些实验的一些关键点吧。因为我们平常在做技术答疑的时候，可能会接到很多客户他会有一些疑惑，为什么我买回去这个药物好像做不出理想的效果？那这个时候，大家需要去确认一些实验的细节，比如第一个一定要确认一下你的，你买的这个药物对你的细胞是不是敏感的？不同的细胞系，它对同一种药物的敏感程度可能是有所差别的。就算是同一种细胞，可能在第一篇文献中，它的这个IC5连续那么级别到了另外一篇文献，它又变成微摩尔级别了。所以，大家前期一定要多调研文献，然后做一些预实验进行浓度，或者有时间披露这个摸索。

另外的话，还有一部分文献可能有多篇文献报道，像A549啊，还two啊，这些细胞系可能它对嗯某一种化合物是不敏感的，大家多查查文献，确定实验方案吧。然后，另外的话，第二点就是一定要提前了解药物的性质，比如像我们MC的伊拉斯汀在官网上是有提示这个产品，它由于本身结构的原因，它就是不稳定的，所以建议是现用现配，最好是不要去储存。嗯，第三点的话就是呃药物的这个溶解与储存药物想发挥作用，第一步一定要保证这个溶解溶解没有问题。嗯，大家有时候买的粉末比较少，可能就1mg两毫克，所以开盖之前一定要记得先离心，嗯，看到那个粉末都已经离到管底了再去溶解。如果大家是做先溶成储备液的话，那母液一定不能超过最大溶解度，嗯，确保是非常澄清的状态。如果嗯，近两次实验用不完的话，一定要分装冻存，不要反复的去动。

另外就是如果您的工作液浓度比较高，比如做到几十微摩甚至100微摩了，一定要确保你用培养基稀释过来的这个工作液是没有药物吸出的，不放心的话，可以去显微镜下观察一下。对于细胞而言的话，一定是要选用生长状态比较良好的细胞。然后铺板密度可能是也是要调整的。如果您铺板铺的太密或者太稀，可能都会影响你这个细胞对药物的敏感性。一般来说，我们在测CCK八的时候，嗯，你的空白组的OD值大概是在1~2左右，这个密度可能相对来说是比较合适的。

嗯，讲完第一条这个经典的嗯铁死亡的这个抑制通路以外，我们再来看一下第二条通路铁代谢。我们前面也说到，其实铁死亡的一个核心特征就是细胞内亚铁离子的积累。那铁代谢它又是一个什么样的一个途径？我们可以看一下铁代谢的话，它主要分为铁的摄取以及铁的流出。我们先看一下摄取的途径，第一条的话，就是这个血清血清转铁蛋白，它可以通过转铁蛋白受体TFRC去介导三价铁离子的摄取。然后此时它会在细胞内的这个环境下被还原成亚铁离子。那第二条途径就是这个右边这个乳铁蛋白以及血红素，它也可以提供这个铁离子的亚铁离子的来源。然后，第3条途径就是这个这边看到这个铁素酸蛋白复合物，它FTHFTL这个复合物如果发生自噬降解的话，也可以生成亚铁离子。这3条途径就导致了这个细胞内亚铁离子的积累。

嗯，那亚铁离子积累之后呢，它一方面可以通过这个铁离子和自由基的这个分段反应，生成我们的直接过氧化产物。嗯，另外另外一方面，这个亚铁离子，它也可以激活这个脂代谢相关的酶a ox, 嗯，这个酶被激活之后，它也可以把这种富含不饱和脂肪酸的磷脂给它氧化成嗯。转化成这种直接过氧化的这个产物。那对于这个亚铁离子的流出的话，主要有两个途径，一个是这边可以看到它有这个细胞膜上的SLC 40A11输出，另外一方面，它可以通过这个chming2介导的这个外泌体的形式，把这个铁储存蛋白FTFTL我们给它转运出去。

铁的流出的话，就可以主要调控的是这个铁死亡的抑制。铁的摄取的话，那就是细胞内如果你过多的亚铁的积累，就会促进这个铁死亡的发生。铁蛋C也是一个非常经典的一个通路。然后，我们这边呃也有一些化合物给他推荐。像这个铁离子的话，主要相关的化合物就是一个铁离子的过载剂，可以增加细胞内这个游离铁的含量。像这三个都是铁的过载剂，然后下面的话是铁离子的螯合剂，它可以减少细胞内的这个铁离子，然后抑制铁死亡。第三条途径是这个脂代谢的途径。嗯，脂代谢它也是嗯铁死亡过程中非常关键的一一个生化特征。它的机理的话，第一个主要是通路途径，主要是中间这一条AC SL 4, 然后LPCT3，嗯，这样和酶a ox这三个酶介导的这个嗯，脂质过氧化可以形成这个磷脂氢过氧化物。

然后另外的话，这些像左边这个PRCYB 521和n ox这些酶，它可以介导各种自由基的形成。然后自由基和这个铁离子亚铁离子发生呃一个分成反应，就可以形成这个过氧化的这个产物。那像右边这些浅色的，像A11 JS h gpx four是刚刚第一条通路已经讲过的，还有后面这些，后面会具体讲，那这些浅色的通路，它主要发生的是一个对铁死亡的一个抑制作用。刚刚左边那些是可以促进铁死亡。

如果大家想调控这条通路的话，也有非常经典的话，比如像嗯，这个有些研究者他会去抑制ACS 14关键的这个子代谢酶，比如像这个PRG 1493这个化合物啊，还有下面这个化合物都都可以抑制它的一个活性。然后还有有的有的作者他可能会去抑制a ox, 然后我没有花很多推荐，具体就看大家的这个实验设计和需求了。此外的话，还有我们如果想去捕获这些自由基，嗯，从而去抑制铁死亡，也是有对应的这个化合物的，像F12-1、LP-1都是非常经典的这个自由基捕获剂。如果你把这个自由基捕获了，那也是可以去抑制这个纸质管氧化产物的形成，从而去抑制铁死亡的发生。下面我们来看一个我们呃客户一个案例吧，这个是今年发表在cell期刊上的一篇非常好的文章。那在这个文献当中，作者他用到的我我们的这个化合物，就是刚刚说到的这个ACS 14的抑制剂PRGL 493, 在这篇文件当中，他是去研究了肿瘤细胞的一个转移。

嗯，发现作者发现A414，它可以促进肿瘤细胞的转移性外盛，就是从血管里面转移到这个肺实质细胞里面。嗯，他在实验设计的时候，他是用了这个化合物去处理它这个具有转移能力的这个细胞，然后再把这个细胞伪静脉注射到小鼠体内。然后，嗯，再去腹腔注射这个药物，嗯，在不同的时间点去注射。注射之后，然后去研究这个细胞转移到肺里面的一个情况。这边是它的一个结构图。嗯，上面这个第一行和第二行的话，它这个我没有经过灌注，意思就是说它没有额外的去清除这个血管里面的这个转移性细胞。所以看到嗯，你不管是嗯。

空白对照组，以及还是你是用了我们的这个PR焦1493化合物去处理，看到的信号可能没有太大的差异。但是一旦你把这个嗯，肿瘤肿瘤血对把这个血管里面的这个肿瘤细胞给它清除掉，那你可以更清楚更直观的看到转移到肺里面的细胞到底有多少。可以看到，如果是空白对照组的话，它这个肿瘤细胞转移的是非常厉害的，就整个肺里面都有这个细胞。但是，如如果你用ACL4的抑制剂去处理的话，发现这个肿瘤细胞的信号是明显减少的。由此呢，作者他就证明这个化合物它可以通过抑制AC 14的一个活性，去减少这个肿瘤细胞的肺转移。所以这篇文献它是研究这个肿瘤转移相关的一些机制。

然后用到了说我们这个化合物。嗯，下面也是另外一个客户验证了这个，我们的客户他用的是经典的这个自由基的捕货机，像F12-1以及LP-1都是非常经典的自由基捕获剂。在这个实验当中，作者用伊拉斯汀或者他的这个失踪器去诱导了死亡，然后发现这个FB2-1和LP-1是可以抑制的。具体的话，检测指标，一个是细胞活力，那你的铁索诱导肌可以去抑制细胞活力。然后，铁索的这个抑制剂的话，又可以恢复细胞活力。还有另外一个第2个指标是活性氧。嗯，铁索诱导剂它可以诱导活性氧的生成。然后加了抑制剂之后呢，它会被受到抑制。第3个指标就是这个，它检测这个脂质过氧化的一个水平。铁死亡表剂可以显著的上调这个直接过氧化产物，然后加了这个抑制剂之后呢，它会受到抑制。

这篇文章的话，就证明了这两个自由基捕获剂对于铁死亡的一个抑制作用。然后下面这几个途径可能相对来说不是那么的不是那么的热门吧。第一个是这个甲醛物酸的一个途径，这个乙酰辅酶A在经过在这个HMGC2这个还原酶的作用下，会生成这个甲醛酸。然后甲醛涡酸通过一些反应又可以生成这个IP pipp的话，它是可以调控系带半胱氨酸CT RA a的一个成熟，这个东西它是可以去嗯影响gpx four的一个合成的，因为我们前面说到了g PX four, 它有一个活性中心是携带半胱氨酸，所以你如果控制这个。嗯，他胱氨酸转运体的这个成熟，那你g PX four的合成就会受到影响，然后你的铁丝就会受到调控，那这个就是甲醛木酸途径。

嗯，还有一些其他途径，主要是体现它，它的主要作用是抑制铁死亡的。我这边给大家汇总了一下，比如中间这个am2辅酶石范成的这条通路。泛醇，它是辅酶时的一个还原形式，然后，它是可以去捕获一些自由基的。我们前面也说到自由基，它是可以去促进直接过氧化的发生的。那你这个泛醇如果把自由基捕获，这个直接过氧化过程呢就会被抑制。然后的话，你这个a FM 2其实还可以去通过激活这个膜修复系统，这个膜修复系统，它是一个由12个亚基组成的一个调控细胞增殖和DNA合成。嗯，这个d ho o DH它可以将辅酶石还原为泛醇，然后去抑制线粒体内膜的一个铁死亡。这种机制，它独立于细胞质中的这个g PX four和a FM 2的一个路径。所以在线粒体g PX four功能缺失的时候，D ho DH这条通路它可以通过。

维持这个辅酶石泛醇这条行为，同时去延缓铁死亡的发生。如果大家想调控这条信号通路的话，嗯，也有非常经典的化合物，一个是a FM 2的一个抑制剂。那你如果一直成2的那下面这些通路都会被受到抑制。还有一个是d ho DH的一个抑制剂，这个化合物。可以起到d hod的一个o DH的抑制作用，从而去抑制嗯这个负面示范纯的这样通路，然后去抑制这个线粒体的一个铁死亡。

那这几条通路，它发挥的主要是这个抗氧化的作用，以就是对铁死亡的一个抑制作用。下面我们来看一下我们客户使用这个化合物的案例吧，比如刚刚说到的这个if f SP, 它是一个a FM抑制剂，那作者发现这个A549细胞，它可能对R23这个经典的铁索的化合物其实是不太敏感的，可以看到一直做到10μmol。嗯，这个细胞对于这个RSL3的这个响应并不是很明显，它的细胞活力下降的并不明显。那如果我用了这个FS PE 1嗯去处理这个A549细胞，因为它是这个细胞是一个FFMR2高表达的。如果我用我这个a f Mr 2的抑制剂的话，可以看一下是这根红色的线，可以显著的提高了这个化合物对R413的一个敏感性。

然后右边的话，就是除去细胞活力以外，检测的这个脂质过氧化的一个水平。用的这个C11玻璃派的一个探针，嗯，看2413，它其实诱导的这个纸质挂画产物是比较少的。如果我把L2413和这个FSP连用的话，这个直接过氧化产物明显。增加了，所以结论就是这个a f Mr的抑制剂，它可以增强A549细胞一种a f Mr高表达细胞对R3的这个敏感性。嗯，下面的话给大家介绍一个一部分更干货的内容，就是铁死亡的标志物，以及他的一些推荐的检测工具。等一下，喝口水。嗯。那前面讲的主要是一些经典的信号通路，或者说近年来相对比较发现的比较新的一个信号通路，以及相关的这个空气化合物的推荐。

大家有如果有什么问题的话，可以先打出来，待会答疑时间再跟大家一起讨论，或者说对我们哪些化合物感兴趣的话，也可以留言。或者是联系我们的小助手都可以，然后下面就给大家介绍一下这个铁死亡的标志物和检测工具吧。首先给大家汇总了一下目前铁死亡比较经典的一些标志物，嗯，有需要的小伙伴可以先截个图。第一个是细胞表型的一个变化，那细胞细胞表型的话，最重要的就是这个线粒体的一个萎缩，然后还有细胞膜的一个破裂。然后如果去用这种细胞活力检测试剂，像CK8啊MTS这种都可以检测到细胞活力的下降。然后，第2类的话，是脂代谢的产物。我们刚刚前面也说到铁死亡，它的一个核心特征就是这个脂代谢产生的脂质过氧化产物，还有这个铁离子。那脂代谢产物有这个p ohh磷脂氢过氧化物，还有一些附加的产物，比如m DA啊，CHN1这种都是比较经典的脂代谢产物。嗯，其他代谢的话，第一个就是刚刚说到的这个亚铁离子的积累，还有这个活性氧的一个生成，也算是脂质脂代谢的一个附加产物吧。然后，还有细胞内的这个抗氧化剂接取的下降。

嗯，相关的一些信号通路上面蛋白的变化，有这个铁代谢相关的，像转体蛋白TF re 1啊，还有这些嗯FT1，然后还有SLC 40A11.以及他们这个具体是上升还是下降，都给大家罗列到这里了，还有脂代谢的一些关键蛋白，比如AC、SL 4.

嗯，A ox系列的，还有这个CXR，他们都是会上升的。还有这个X j ch gpx four这条通路上面关键的。XC的这个组成，蛋白质A11，还有下游的这个g PX four, 然后它们的含量是下降的。还有一些其他抗氧化通用的话，像N、F2是上调的，F、SP是下调的，我们这里给大家汇总的是一些相对来说文件里面做的比较多的，然后经典的一些标志物也不是所有的，这个大家最好是参考文献来。多看一看，确定自己的检测指标，或者多选用几个，多选用几个检测指标会比较准确一点。首先，我们来看一下这个细胞表型，嗯会有什么变化。这个也是一个案例。那这个作者是做了一个小鼠的实验，然后分组的话，一个是空白对照组，还有一个嗯红外处理的组，然后还有一个红外加上，然后，IP杠一就是那个纸质过氧化的一个抑制剂，然后去看这个细胞肺泡细胞里面的一个变化控门的药酒。它就是一个嗯，正常的一个线粒体。线粒体的结构比较完整，它的脊也可以清晰的看见。然后，用了红外组，相当于是嗯一个铁索诱导的组，可以看到线粒体它会收缩。

然后这个磨密度增加呀，以及这个内部的这个几个结构被破坏了。然后，如果加了在这个基础上去加了这个脂质过氧化的抑制剂的话，可以看到这个线粒体的结构又恢复恢复了相对于这个诱导组来说，然后内部的企也是非常完整的。那这个就是通过这个细胞表型去观测。透射电镜的话，大致的步骤大，大概就是这个样品固定脱水，包埋前面染色拍摄这样的一个步骤。

嗯，然后如果是大家想做这个细胞实验，也可以通过最直观的这个细胞活力检测，去初步的看一下这个铁死亡有没有做出来。表现为这个细胞活力的下降，像我们MC的这个C、CK 8、MTK这样的试剂都是可以用来检测细胞活力的变化的。嗯，然后我们还可以检测一些脂代谢的产脂代谢的一些产物。嗯，脂代谢的产物的话，包括最初产生的这个磷脂氢过氧化物，还有随后产生的丙二醛MDA以及Cha，他们在损伤细胞膜中起着非常关键的作用。嗯，这边给大家推荐一个经典的探针，是这个581591的C11探针。这个是文献里面用了非常非常多的一个检测，这个就是过氧化的荧光探针，它是一种脂溶性的比率型的荧光探针，然后可以嵌入到细胞膜内，并且和细胞脂质发生一个相互作用。

在正常细胞里面，它是一个红色的荧光。嗯，用红色通道就可以看得到。然后，如果是有铁死亡发生的话，它会因为形成了这个脂质过氧化物，探针会被氧化，发出这种绿色的荧光。所以，在铁丝亡过程中，这个绿红荧光比例是会上升的。这边是一个案例，嗯，第一行的话就是没有经过任何处理的。第二行是经典的皮送诱导剂，伊拉斯丁处理的。第三行是加了这个F1-1铁死亡的抑制剂，嗯，第四行也是加了另外一个抑制剂。我们可以看到铁丝网诱导之后，这个红色的荧光显著下降，然后绿色的荧光显著增强。这种绿红荧光比例上升，那就证明铁死亡的一个发生。如果你在此基础上去加抑制剂的话，红色荧光又恢复了，然后绿色荧光又变弱了。

所以这个是一个非常好的一个脂质过氧化的探针，那除了这个C11之外的话，我们还有其他的呃这个纸质过氧化探针，比如像绿色荧光的，大家可以根据自己的这个需求去进行选购。然后，除了检测这种直接的脂代谢产物，我们还可以检测脂代谢的一个其他的产物。比如刚刚说到的MDHN1。那需要提醒大家的是，这两个脂代谢产物在除了铁死亡嗯之外的这个其他的氧化引起状态，可能也会产生的。所以在实际应用当中，一般要和其他的检测方法进行相互的一个验证，这样你检测结果会比较可靠以及准确。嗯，那具体表达水平的变化的话，MDCHHN都是会上升的。像左边这篇文献，它就是多种方法联合检测的，它是一个有坏死性小肠结肠炎的一个病理组织切片。然后，第一张图是通过免疫荧光去检测了ch ne ch 1, 它在这个切片病理切片中是会上调的，证明它这个组织是有皮死亡发生的。

然后下面他又通过这个免疫组化，去检测了AC SL 4以及GGPX four两个非常经典的铁丝网相关的蛋白，可以看到a CSL 4它这个信号是显著增强的，然后g PX four在病理组织切片中会下降。所以这篇文章它是通过Cha1，然后AC SL 4以及gpx four三个指标去进行了相互验证，证明它这个病理切片中是有铁丝网的发生的。然后，的话，我们MC的试剂盒呃有一些m DA的试剂盒可以通过比色法呀，或者其他试剂的可能也可以通过比色法或者荧光法去检测，进行定量的一个检测，适用于不同的样本，血清血浆组织细胞都可以做。然后还有一个Cha的抗体可以用于WB、lya嗯免疫荧光等等实验。

嗯，还可以检测这个脂代谢的这个副产物活性氧。活性氧的话，大家可能在自己其他的课题或者其他实验中也有用过。嗯，活性氧检测一般就选用这个比较经典的d CF hda的这个探针，它进入到细胞内部之后，可以脱脂化，被氧化成具有强烈荧光的DCF。那是一个绿色荧光，有绿色通道就可以检测。这边也是一个案例，左边的话，我们客户他是同时去检测不信氧，以及嗯，刚刚说到这个这质过氧化。

嗯，第一行的话是它那个比例型纸质转换探针C11探针的一个图，可以看到绿红荧光笔是增强的。然后，下面这个图的话，是一个光合性能检测，这个绿色荧光也是显著增强的。那通过这两个指标呢，作者就证明，它的这个纳米药物是可以去诱导1080细胞发生铁死亡的。嗯，这边我们除了有经典的这个DCF、hda绿色荧光探针以外，也还有一些嗯，其他就是像这个红色荧光D、H, 以及我们提供阳性对照试剂的这个世界，和都是可以用来去检测这个活性氧的。然后下面的话，还有可以检测这个细胞内亚铁离子的积累。细胞内铁死亡，如果是发生铁死亡，细胞内会有这个亚铁离子的积累，导致这个氧化应激的增加，以及脂质过氧化的发生。所以，大家去监测这个细胞内的铁含量，或者说亚铁亚铁离子的。

与三价铁离子的比值就可以作为铁死亡的一个验证。嗯，这个大家用的比较多的这个特征可能是这个orange的一个探针，它是一个特异性的亚铁离子探针，可以和亚铁离子结合，然后形成这种橙红色的荧光复合物。左边是一个案例，那作者是探究了这个PGS，它是一种天然产物，在不同浓度时可以减轻嗯缺氧诱导的这种铁死亡。大家可以先看一下这张图，缺氧它这个缺氧条件的话，可以看到红色荧光性质增强，那说明白铁粒子积累了，诱导了这个铁死亡。那加入这个不同浓度，低中高三个。天然产物的之后，不同浓度的天然产物之后发现红色荧光减弱了，那可以证明铁死亡受到抑制。

所以作者的结论是，这个天然产物可以减轻BVR细胞中缺氧入到的铁丝网。嗯我们除了这个橙红色的这个for orange的这个银色橙色探针以外，我们还有绿色荧光的这个线粒体特异性的探针，以及红色荧光的这个亚铁离子探针。还可以检测，除了像刚刚说到的脂代谢产物啊，还有铁离子啊，还可以检测细胞内这个抗氧化成分GCH的一个含量变化。在铁死亡发生的时候呢，这个GHGSH水平是会显著下降的，因此呢，细胞内的抗氧化能力会减弱，进而导致这个脂质过氧化物的积累。像检测方法的话，有很多比如说比色法呀，荧光探针法，依赖散，还有这种HPLC质谱，都是可以用来检测的。

大家可以根据这个手上有的试剂啊，或者说时间条件进行选择。像我们MC家有这个铝色法检测的这个JH的试剂盒，还有这个流程的探针，JCH荧光探针。然后还有这个。其他的一些探针都是可以用来检测GSH的一个含量变化，那这个客户他是用的我们这个101899这个货号的。探针作者用的这个条件呢，是HGC2期细胞，它通过敲低不同的这个敲低去敲低了这个H-1基因，发现敲低之后呢，可以去。减少这个JCH的一个含量，证明铁死亡的一个发生。最主要的，它还通过这个伊拉斯汀和这个DF，也是这些死亡的一个抑制剂去联合证明他发现伊拉斯汀它处理之后，这个细胞GCH它会减少的更明显。然后加了这个d fd fod fo之后呢，这个铁丝亡的。

程诺又受到抑制了，所以所以他证明他在他这个实验体系过程中，是有这个铁丝网的一个发生的。那检测指标就是这个G，CH通过探针来检测。我们最后再说一下这个相关蛋白的表达变化，大家可能平常去检测这个标志物的时候，蛋白也做的比较多，WB实验做的比较多。这边也就是再给大家放了一下，嗯，哪些哪些是一些比较经典的蛋白。不同通用的一些蛋白变化，像铁代谢的话，T81上调，FTH1下调。还有SLC 40 AA 1也下调，那只代谢的话像AC SL、four a ox这些都是非常经典的跟脂代谢相关的一个美。嗯，他们是上调的，像经典的X cg h GPS four通路的话，这个A11蛋白会下调，GPS four也会下调。

还有其他抗氧化同用的一个蛋白变化，这个我们MC都是有对应的抗体的。大家感兴趣的话，可以嗯去申请申请试用装，或者去联系我们的销售。要不要购买之类的。嗯，下面看一下两个案例吧，一个是嗯，在这个案例当中，作者检测这个标注是g PX four, 它的诱导条件是这个蓝光40nm波长，它可以可以看到这个。Cox2是上调的，然后GPS for下调，证明这个波长的蓝光是可以诱导他这个细胞铁死亡的。嗯。然后，第二个案例的话，是嗯，作者检测三个标志物，一个是TFR1，一个是cox2，还有这个A11蛋白。它用的诱导条件是这个这个B1的这个化合物。

可以看到TF的这个。云荧光染色是显著变得更亮了，然后Co o Co 42也是上调的，还有这个A11它是下调的。如果作者他发现他去过表达NF2的这个基因，可以去抑制这个铁死亡的发生，看到这个TF下调了。然后CX2又下调了，A11又恢复了，所以TFIA CU X2 A11也是非常经典一个铁锁王标任务。然后我们今天的这个铁死亡的分享就结束了，最后给大家分享一个我们MC的资源，一个是我们制作的非常精美的这个信号通路图，里面汇总了所有的信号通路图之间的一个，包括我们前面说到那些信号通路之间的一个关系。嗯，然后的话，第二个是我们做了一个TS王的研究手册，里面包含了嗯，我们今天分享的很多内容，还有一些其他的内容，可能嗯，对这个研究铁死亡的老师和同学们会有一些帮助，或者是在选购试剂呀化合物方面能够提供一些建议。大家如果有需要的话，可以嗯扫码去下载一下。

那下面的时间，我们就再次交给我们的萌佳主持人吧。好的，非常感谢朱老师的精彩分享，真的让我们收获颇丰。感觉打开了关于铁死亡新世界的大门。那接下来，接下来看一这样直接讲，可能有点抽象。嗯。来。这张可以看一下。

它这嗯，它这个就是一个有离铁离子的一个影响，受到哪些分子的影响呢？主要是这几条途径嘛，一个是嗯，这个介导铁离子的摄取，比如像这个血清转运蛋白啊，TFRC啊，这些转体蛋白受体。还有这个SLC 11A2, 然后还有右边这些乳铁蛋白或者血红素，都是可以接到呃，这个铁铁库的一个形成，然后转运出去的话，又受到像SLC 40A1, 还有这个PRO to这到外泌体啊。都是可以去控制这个铁细胞内铁离子的一个风度的。下一个问题是，新同学问铁丝亡会有益吗？嗯，有益。这个看你是在什么型上做。像刚刚说到的这种嗯癌症的研究的话，你想通过诱导铁死亡去杀伤癌细胞，那相对来说肯定就是对你抗癌是有益的。那也有一些病理的过程，比如说比如像那种嗯心脏病例，有一个是小鼠的实验。

像这个这所有的记号等一下。嗯。这个就是一个铁死亡的诱导肌，用在嗯小手上啊，这个是一个抑制剂，不好意思记错了我记得好像也是有的。嗯，具体可能要再去看文献看一下，像你做癌症的话，也可以用铁爽诱导剂去研究它这个抗癌效果呀，所以也是可以用小鼠体内的。不管是抑制剂还是诱导剂，都是有不同的模型在做的。啊。嗯。嗯，下一个问题是散落星河。同学们，铁死亡与氧化应激有何关系呢？

嗯，我觉得这个氧化应与氧化应激之间的关系，可能主要是通过脂代谢这个通路来体现的。因为铁死亡过程中，嗯，直接过氧化它其实就是直接的一个氧化过程嘛，那也算是氧化引起的一种，包括一些直接过氧化产物的生成啊，或者说，一些附加产物，像啊，活性氧的生成，以及这个抗氧化剂J、H的下降，都算是跟氧化应激其实是有关系的。嗯。嗯，这个这个数字同学们，嗯，F spy n rf two等哪些指标升高，哪些指标降低，有表格吗？这个有的，给大家翻译一下。一些常见的相对来说比较常见的这个指标的变化。

那这里就是有一个表格呀，像血代谢通路上哪些蛋白，它具体是上调还是下调，然后脂代谢。上调还是下调。嗯，FSP1的话，这个老师说的就在这里，这个其他氧化同FSP 1F2.嗯，这些指标是上调还是下调，这边都给大家汇总了，大家也可以再去微信里面再多看看确认一下。大家可以截图留存一下，或者是找MC的销售代表咨询一下课件。嗯，下一个问题，嗯，这个海同学问检测细胞内游离铁离子，二价铁离子可以采用哪些工具或者是方法呢？再给大家翻译一下亚铁离子的检测，铁代谢确实是一个比较经典的检测方法。亚铁离子的检测，呃，我们客户用的比较多的是这个这个橙红色的这个荧光探针，它可以直接和细胞内亚铁离子结合形成一个橙红色的荧光复合物。这个就你看一下这个HH是一个缺氧诱导的，它通过缺氧诱导的这个细胞的铁丝网，然后这个红色荧光会显著增加。然后，除了这个探针，我们也有一些比如说可能可以检测线粒体特异性的这个亚铁离子探针。

可以去研究三粒体的一个铁丝网，还有这个红色的其他的这个荧光探针。大家可以按需选择。嗯，那我们本次大一的最后一个提问是，这位同学问，铁死亡和双流死亡是有关联的吗？嗯，目前的话，我这边还没有太关注这个双流死亡，我记得我们之前好像写过一篇推文，专门介绍双流死亡，大家可以嗯。