流式细胞术染色方法，轻松获取高质量流式细胞术图 | MCE原创

你还在为细胞表征检测而苦恼吗？如何得到文献中常见又漂亮的流式细胞树图呢？蒙CC带你一探究竟。那什么是流式细胞数呢？流式细胞术是一种对液流中排成单列的细胞或其他生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。其优点包括特异性高、分选快速、灵敏度高，同时检测多种特征，分选纯度高等。我们以最常见的线粒体膜电位燃料JC-one为例，带大家一起看看实验步骤吧。JC杠弯染料以电视依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内JC-one聚集在线粒体机制中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光。在线粒体膜电位较低时，JC-one不能聚集在线粒体的机制中而产生绿色荧光。

首先一起来看一下JC-one染色液的配制方法，我们使用DMSSO配置5mg/ml的母液。然后用细胞培养基或PBS稀释母液配制成1~20μg/ml的工作液。需要注意，不同细胞所需工作液浓度不同，可以自行调整，并且工作液需要现用现配，不可储存后再使用。以六孔板培养的细胞为例，我们将细胞按适宜密度接种在孔板中，次日取0.5ml细胞悬液至无菌离心管内，细胞离心器上清，然后加入1MLJC杠万工作液重悬细胞，在培养箱馥浴15~30分钟后，400g离心，5分钟气上清，用PBS洗3次细胞，最后用1ml新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，立刻进行流式分析或荧光显微镜观察。上机分析效果如图，红色荧光用fl two通道检测，绿色荧光用f Fi TC通道检测。通过JC-one，我们可以检测到人参皂苷RD和N乙酰半胱氨酸对线粒体功能障碍的堡作用。

通过JC杠万染色，我们清晰捕捉到了线粒体膜电位的变化。