武大医学研究院张博Cell分享：一种高效精确的基因组结构编辑工具原创

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大家好，我是来自武汉大学医学研究院的张瑞文，很荣幸被MCE邀请参加今天的一座论坛。今天给大家分享的主题是扩增编辑，实现从小片段到照壁级别和染色体范围内的高效精准复制。基因组的遗传变异可以说是万病之源，它包括约7000种遗传疾病，癌症、部分代谢性疾病和自身免疫性疾病。在约7000种遗传病中，在世界上就有3亿的患者，而中国就有1800万。而95%的遗传病是没有特效药的。因此，基因治疗是最佳的一个根治方法。目前针对遗传变异的主流编辑工具有以下三种，核酸酶是由卡斯na和一个SGRNA靶向我们的目标DNA进行切割，形成一个双链断裂，会导致一个随机的插入和缺失，一般会用来基因的KO。第二个呢是单碱基编辑。

三年级编辑是由N卡man偶联了一个托安酶。在靶向的DNA上产生一个切口，同时在脱氨酶的作用下产生特定的点突变，例如C到T或者A到G。而先导编辑是恩卡斯曼偶联的一个逆转路酶，在派杆癌的引导下对靶向的基因组进行一个at tcg任意的一个转化，同时还有小片段的插入或缺失。该剪辑编辑和先导编辑，它能够实现从单个剪辑到十几个剪辑的一个编辑，能够修正小片段的遗传变异。但基因组的遗传变异不仅有小片段变异，还有结构变异，包括扩增、插入、到位和删除，而结构变异也占了48%，是一个比较高的比例，因此针对结构变异的研究也是有相当的必要性。

结构变异中的插入到位和删除，目前已经有呃，现有的精准的编辑工具。插入呢是基于PE相关工具实现照壁级别的一个精准的一个整合，整合它是利用PE系统和一个整合酶疫系统，将内源的一个DNA插入到基因组上。同时它可以将呃内源的一个DNA进行一个进行一个导位，而PM是基于PE系统实现的一个删除，它是利用一对派感癌逆转录产生呃两个三撇flap，这个三撇flap呢，它可以与自身的基因组互补，然后有一部分呢是自身互补，最终实现一个大片段的基因组定义的删除和一个外源基因的一个插入。

对于结构变异中的扩增，目前是采用一对SGRNA和class nine, 这两个SGRNA呢是靶向被扩增区域的两端，然后喀斯奈介导进行切割，但是它的边际产物由导位复制和删除，是一个复杂的混合物，而且在进行256KB和807KB的扩增时，它的编辑效率非常低，都没有1%。但是，基因扩增在生物学中也扮演了非常重要的角色。首先是在新基因产生的两种模型中，基因扩增都参与其中，其次是在人类基因组中，串联重复序列占了50%以上，其中包括卓斯利端粒人力源的逆转录病毒原件、耐转作子原件和science转作子原件。

而且在癌症中也有基因扩增的现象。图中为呃正常人和乳腺癌患者的一个肺的一个图，其中卓斯利呢会标记为绿色，喝吐基因被标记为红色。与健康人的这个呃细胞相比，乳腺癌患者的细胞中它有大量的红色的点，表明乳腺癌患者的喝吐基因的拷贝数大量增加。而且也有很多基因在其他的癌症中也被发现了扩增的现象，例如麦特和M基因。而且在某些癌症的耐药的细胞系中，他也发现了基因扩增的一个现象，对耐药的肺癌细胞系进行一个全基因组测序，我们发现它有多个基因的拷贝数是上升的，同时QP去检测它的mi的一个表达，也发现了mi水平有显著的上升。这说明基因扩增在癌症的发生和发展中也是扮演的重要的一个角色。

基因的拷贝数异常与人类疾病也有一个非常大的关联。某一些疾病它与基因拷贝数的一个增加有关。在亨廷顿舞蹈症的病人中，他的这个CG重复是37~80个，但是在健康人的其中只有10~26个。而有一些遗传病是于基因的拷贝数减少导致的，例如在这个基因营养不良中，它是由于这个D4Z4的这个重复序列缺失导致的。在健康人的体内，它有11~100个D4Z4这样一个重复序列，而在患者呢，有少于10个这样的一个重复序列。

如果能有一种工具对这类型疾病进行一个建模，或者进行一个治疗，那么将会有一个重要的意义。那么接下来就有一个科学问题，就是我们如何实现高效精准的低音扩增呢？就此我们提出了一种可以实现精准扩增的方法，扩增编辑命名为ae，我们设计了一对PM out的一个派杆A，然后派杆A靶向了我们想要扩增的区域，然后PE蛋白会对这个靶向的这个区域产生一个逆，然后在逆转入酶的作用下逆转出逆，逆转入出两个三撇flap，这两个三撇flap退火之后会作为新DNA链合成的一个引物，然后以原始的这个基因组为模板进行DNA链的合成，然后会在这个逆可的这个切口处停止它的合成，最后呢，会产生一个复制的这样一个现象，将我们边界区域进行一个精准的复制，同时插入了我们一个小片段的呃，Flap序列。

为了对ae的边界产物进行鉴定，我们设计了三种PCR的方法应用PCR的引物，靶向扩增区域的内部，应al披萨的引入是一条靶向插入序列，另外一条是靶向扩增区域的外部。对于这两种披萨来说，是只有编辑了才能够产生一个PCR的条带，而的PCR呢？它的引物是靶向机，就扩增区域的外部。与外type基因组的PCR产物相比，只有在编辑之后，它才能够产生一条更大的条带。我们在VGFA和H1K3这两个位点扩增长度为178BP和234BP进行了一个探究。一、硬PCR跟一样的PCR确实是只有编辑产生了一个条带，外type是没有任何条带的，而auto套的PCR产生了一条比外type相比更大的一个条带，我们对这个较大的这个条带进行交回收，再进行三个测序，我们发现它确实是进行了一个精准的扩增，同时也插入了我们的flap的一个序列。

在确定ae能够进行编辑之后，为了提高编辑效率，我们被我们对派杆I的flagp长度进行了一个优化，在C密位点扩增长度分别为200BP和8KB flap长度我们设置为10BP到100BP，在复制200BP时，Flap长度为30BP是最优的一个结果，在复制8KB时，Flap长度在50的时候也能达到一个较高的边界效率。在之后的研究中，我们就沿用了这两个选择。

我们也进一步优化了flap的GC含量，发现不同的GC含量都能够进行一个高效的编辑，因此我们在之后的研究中都使用了50%的一个GC含量。作为一个新的编辑工具，编辑的精准性是非常重要的。我们通过二代测序检测了编辑产物的一个精准性。与外typeb的相比，编辑后的产物它有三个新的junction，我们通过二代测序检测这三个junction的一个编辑情况。我们在VGFA位点和HK三位点检测了扩增200BP产生的三个章程精准度和inel，结果显示精准度都接近于百分之百。

为了证明ae它具有普适性，我们在8个细胞系的多个位点进行了不同长度的一个复制，从210K8K不等。结果显示，在这8个细胞系的多个位点都能够进行一个高效的一个编辑，其中包括一些常见的人类细胞系和小鼠细胞系，以及人的原代替细胞，都可以进行一个高效的编辑。接下来我们对这一部分进行一个小的总结。我们开发了一个名为ae的基因组扩增的方法，在扩增200BP和8KB时，最优的flap长度分别为30BP和50BP，编辑产物的三个章品的精准度都接近百分之百。Ae也能够在多个细胞系的多个位现高增。在证明ae可以进行精准高效的编辑之后，我们便想，那ae扩增金组的上限和下限分别是多少呢？在这里我们对扩增的下线进行了一个探究，我们设计了一对pag，这两个pag产生的逆可之间的距离分别是20BP到126BP不等，编辑效率在28.6%~52.3%。

我们进一步对扩增20BP的这个边界产物进行了auto的PCR，然后去二代测序。出乎意料的，我们发现了边界产物中不仅有2A，也有3A。这里的2A是指它发生了一次复制，有两个拷贝，3A的意思是我们对目标区域的扩增是有三个拷贝的。那么这个3A到底是怎么产生的？是是发生了多次边界，产生了多个拷贝吗？

我们发现经过一次编辑后的这个序列，它里面仍然保留了。泰达能够靶向的spacer和P序列，这就为他第二次编辑提供了一个可能性。如果第二次编辑产生的这个flap它如果自身相互互补的话，那么编辑区域的拷贝数就会以2的N次方的一个形式进行递增，如果产生的这个flap与第一次插入到基因组的这个序列进行互补，那么边界区域的拷贝数以非2N的区方式进行一个递增。同时，我们在Q502细胞中也发现了编辑效率大于100%的一个现象，我们进一这也进一步验证了ae可能会发生多次编辑的一个猜想。那么到底是不是由于多次编辑导致了编辑效率大于百分之百？我们使用了限制性酶切酶对D编辑后的一个基因组进行一个片段化。通过比较酶切前后的编辑效率，我们发现在VGFA位点复制178BP时，编辑效率由140%上升到了800%。

复制1KB时，它的编辑效率由66%上升到了百分之接近200，表明确实是发生了多次编辑，导致扩增区域存在一个串联重复，在H1K3位点，它也是存在一个同样的趋势。而当复制8KB的时候。它两酶切前后的片段没有一个较大的一个差异，而在HK3细胞中，它8KB的复制酶切前后是有一个差异的，但是也不是非常大。就此我们得出一个结论。随着扩增片段的。

嗯，变大，多次编辑出现的频率就降低了。在确定用多次编辑确实存在之后，我们非常好奇多次编辑产生的拷贝数具体是一个什么情况，最多能够产生多少个拷贝呢？我们对HK3、rux y hk4这三个位点复制210K、8K三个不同的大小片段的DNA进行了一个三代测序，我们发现在复制200BP时，它的拷贝数最高能够达到14或者10、13或者14个拷贝。为了全面了解我们编辑产物的情况，我们将编辑后的293T细胞通过单克隆分选分析了这三个位点它的一个编辑情况，通过auto的PCR，我们将我们在跑焦将扩增后的片段进行一个统计，然后发现我们的编辑产物主要可以分为四类，Delicioustion 2ana和外typeb de delicioustion就是两个Nick之间的序列全部被删除了，2A就是呃，只发生了一次编辑，有两个拷贝，Na是发生了多次编辑，具有N个拷贝，然后y cap就是没有被编界的基因组。那由于293它是一个多倍体的细胞系，在一个细胞中它的不同染色体被编界的情况是不一样的，所以它一个细胞有可能会出现多种情况，就是我们图中的V阴图中的这个交集，它就代表了。

一个细胞出现的不同的一个情况，统计2N跟na的这个频率，我们发现在HP3和HP4位点N1的频率是高于2A的。接下来我们对这一部分进行一个小结，我们发现ae呢可以实现短至20BP的一个扩增，在扩增短片段20BP到8KB时，它能够形成串联重复，在扩增200BPDNA片段时，它最高能够实现14个串联重复。

对ae有了初步的了解之后，我们对ae应用的一个潜在应用做了一个初步的探究。首先我们在293D细胞中建立了一个乱序的一个GP序列，只有经过ae的编辑之后，这个乱序GP序列才能够得到一个校正，细胞才会发光，我们将编辑后的细胞通过流式去检测它的。效率是在37%左右。接下来我们对内源的非编码A麦克21进行了一个扩增。麦克R21MMRR及它是有3.5KB的，而且，但是其中能够形成镜环结构的关键区域它只有200BP。这个镜环结构经过进一步的切割和解旋，能够形成成熟的一个MMRRA，这个MRA，它能够靶向下游的一些M剪去剪切它或者阻碍它的一个翻译，进而使它下游的一些基因的表达量下降低。我们利用ae对它的一个静环结构区域进行一个扩增，使它的拷贝数增加，进而使它的表达量进行。

增加。我们对编辑后的细胞进行编辑效率的检测，发现它的编辑效率也在百分之百以上，说明发生了多次编辑。用QPCR去检测R21的一个表达水平，与外type相比，编辑后的细胞表达水平是有一个显著提升的，而下游基因的表达水平与NC相比也是有一个下降的。

最后，我们在阿尔法地平的模型中也探究了一个ae的应用潜力，在健康人体内有4个这样功能的阿尔法基因，而在阿尔法地平的患者中只有1个功能性的基因。那么如果能够增加HP基因的拷贝数，就有可能去缓解阿尔法地平的一个疾病的症状。我们在红细红细胞相关的细胞系Q料中建立了一个阿尔法地平的模型，我们精准的删除了其他的拷贝，只保留了一个拷贝的HHB1基因，然后通过ae复制增加HB1基因的一个拷贝数。我们用DDPCR去检测这个疾病模型，就这个de delicioustion它确实是只有一个拷贝，而通过ae编辑后的呃细胞，它的单克隆中，它的拷贝数是有3~4个这样的拷贝。

它的MRA水平与的这个相比也是有一个显著提升，蛋白水平也是有显著提升，这些说明ae编辑可以提升内源基因的一个表达水平。接下来对这一部分进行一个小结，A可以实现对乱序GP的一个校正，在对21进行扩增时，它可以进一步下调下游基因的一个表达，它也可以对细胞内的内源基因进行过表达，可以作为一个潜在的治疗工具。在前面一部分，我们对ae扩增的最短的极限进行了一个探究，接下来我们对ae扩增的最长片段进行了一个验证，一系列实验都证明ae能够进行30KB到100兆B的扩增。

在293T细胞中，我们设置了不同的扩增长度，在复制30~100KB时，在9号染色体和6号染色体上都能够实现一个高效的一个扩增。在扩增呃1兆到3兆时，最高效率有27.7%，在扩增100兆B时，它也有超过1%的一个编辑效率。我们进一步通过fish水实验将照壁级别或者染色体级别的一个扩增进行可视化。在十二二染色体上，我们进行3兆B扩增的单克隆里进行一个fish实验，用绿色去标记染色体的着色力，用红色标记了复制区域内的一段序列。与外typeb的单克隆相比，在editit单克隆中，绿色的点周围有四个红色的这样的一个点，说明它确实是发生了一个复制。

在6号染色体上，我们扩增了100兆B。我们与这个没有编辑的这个染色体相比，编辑后的这个染色体，它的染色体的长臂从2.84μm增加到了5.74μm，增加了近一倍。这些都说它确实是进行了一个染色体级别的扩增。接下来我们也探究了ae在照B级别扩增的一个普适性，我们在多个细胞系中发现，它都能够进行一个照B级别的边界，其中包括人的原代T细胞、小鼠细胞，说明照壁级别边界是具有普适性的。

我们进一步在人的干人的胚胎干细胞和鼠的胚胎干细胞中进行了编辑，再进行小片段的扩增时，这两种细胞的边界效率都非常的高，而在进行照B级别的边界也是能够进行一个高效编辑的，说明ae，它具有建立解B模型的建立模型的一个潜质。接下来，我们利用ae在疾病对这两种干细胞进行了靶向扩增。我们在人的胚胎干细胞中扩增了20号、22号染色体的1.4兆B，在编辑后的细胞挑单克隆，然后将这些被编辑的单克隆去进行全新组测序。有个tap的，这个相比被编辑后的细胞编辑扩增区域的这个拷贝数是有一个明显的上升的，这两个红色的箭头靶向的指示的是靶向space，靶向的位置中间的这个序列就是扩增的序列。

我们可以发现它的拷贝数确实是有。在小鼠的胚胎干细胞中也是同样的一个现象，说明它具有创染色体别的疾病模型的一个潜力。如果想要作为一个建模或者治疗的工具，那编辑的精准度是非常重要的。我们对照币级别编辑的产物进行了一个二代测序，检测了一下它的精准度。我们发现产生的三个juction的inel尔都是低于1%的，这说明ae级别的也是非常精准的。接下来对我们这个研究进行一个总结，Ae它能够实现高效精准的扩增，扩增的区域是20BP到100兆B，而在扩增20BP到8KB时，它会多次编辑，产生串联重复。这个这个工具为癌症和基因的进化的研究提供了一个非常有利的工具。

同时，Ae也能够够表达内源基因，是阿尔法地频治疗的一个潜在工具，在胚胎干细胞和原代细胞中也能够实现一个照壁起飞的扩增，是潜在的治疗和建模的一个工具。呃，我的分享到这里就结束了，谢谢大家把话筒交给主持人，谢谢。非常感谢我们张博的精彩分享，真是让人受益匪浅，接下来到小M的时间了，嗯，给大家详细的介绍一下我们MC，那MC呢，多年以来一直致力于生物活性分子的研究，服务于全球的生物医学和药物研发和药物发现领域的优质顶尖客户，其优秀的科研成果已经发表在包括CNS在内的数万篇高水平学术文章，生物医学和要研发科研文献中已经突破了46000家。

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好的，那我看有小伙伴问问问题，说目前ae技术在进行有在进行的治疗研究吗？未来有什么治疗前景吗？请张博来回答一下，嗯，Ae现在还没有，就是往临床上或者进一步往前推，但是它在未来我觉得是有非常大的一个治疗前景的，但是它因为它依赖于细胞周期，在对于呃要注射到病人体内的就是编辑那种呃不分裂的细胞，它其实是有一些局限性的，但对于那种造血干细胞，或者在体外编辑T细胞，这种是没有一个受限的。

但是现在还是没有，就是再往前推，因为这个工具刚刚推出来的时间也不太长。好的，感谢张博的回答，那我们有小伙伴们说可以详细的讲解一下ae设计的原理吗？具体是怎么设计的呢？嗯，好的，稍等，我找一下这一页的展示。Ae的设计，它首先要有一对P2的一个派杆，这个派杆RNA，它的这个RTT通过这个PE蛋白逆转录出来两个三撇flap，就是这个单链的一个DNA，这两个单链DNA呢，它是相互互补的，我们在研究中发现这个呃，互补的区域就是这个SSDA的一个长度，一般是30BP，如果你扩增较短的片段，例如200BP或者1KB的时候，在扩增较长的片段8K及其以上的时候，一般用50BP这个flap的一个长度，在这两个flap进行互补之后，它就会作为一个呃。

7链合成的引物，然后以原始的这个基因组链为模板，边解旋边复制，然后在复制的过程中，如果遇到了我们这个切口阳光SP的切口的位置，它就会停止复制。最终实现一个靶向区域的精准扩增，然后会将我们flap区域插入到基因组中。啊，这就是它的基本的，就是一个详细的一个原理，它是基于PE得到了一个编辑工具，PE, 它就是会将呃，Pad pad rana的就是后面的一段RNA逆转录出DNA，是基于这样的一个原理进行了一个编辑。

我这卡了，好的，那我们下一个问题是有小伙伴问，请问ae扩增时拷贝数能控制吗？嗯，Ae扩增的拷贝数如果是在200BP到8KB这个比较短的范围内，目前是没有办法进行控制的，如果想要控制它的一个拷贝数，那么就要从它的编辑效率去入手，去控制我们递送的一个DOS，如果我们控制它的DOS在一个较低的水平，就可以让它的呃编辑效率降低，导致它不能够发生多次编辑，使它编辑的拷贝数降低。

但是而且在呃，进行8K以上，例如10K啊，100K这种长片段的一个复制的时候，我们目前是没有看到一个多次编辑，但是如果你的编辑效率非常高，这些片段也有可能会发生一个多次编辑，导致它的拷贝数不可控，现在目前是没有一个非常好的方法去控制它在一个较低范围内复制的拷贝数。嗯，谢谢大家。好的，嗯，有小伙伴问，Ae上调非编码RA的表达效率如何？能有多少倍呢？嗯。上调表达效率其实还是非常明显的，因为我们只复制了200BP的这样的一个区域，在这张图我们可以看到。

就是我们就是我们扩增的是ae。我们我们扩增的是它这个静环结构，就是M二二二十一的一个静环结构，它只有200BP，对于这个200B的扩增，Ae是能够进行一个多次的一个编辑。这里就是它的一个编辑效率，进行多次编辑，你看与这个we type相比，它这个编辑后的细胞，它的一个表达的水平上调了接近4倍。嗯。好的，那嗯，下一个问题是请问1这项技术目前使用广泛吗？可靠性强吗？相比于传统方式有哪些优势呢？

首先是目前的一个使用，目前有很多课题组就找我们咨询，把这项技术应用于更多的是癌症的研究，因为在癌症中有非常多的这样一个基因扩增，拷贝数增加的这样一个现象，但是过往用于研究这种基因一个扩增，它都是过表达，然后如果利用我们现在的技术，它能够实现一个比较，就是跟。现实的癌症相互比较就是接近的那种模型，而不是通过过表达去进行一个模拟，在癌症中是比较多的，然后它相比于传统的进行一个DNA复制或者扩增的一个手段相比，它的效率高，就像我们刚才讲的，传统我们是用卡斯曼和一对S腺癌，它的效率非常高，其次呢是它的精准度是非常高的。因为传统的它用一对SG和卡line去进行复制的这样的一个编辑，它的编辑产物是一个混合物，其中只有小部分是。

复制是扩增，但是我们这个编辑工具，它的编辑的产物是非常精准的，嗯。好的，感谢老师，那下一个问题是ae对细胞的应用可以作用于细菌吗？呃。因为我们没没有做细菌啊，就是如果它这个系统就是能够在细菌中表达的话，我我认为理论上是可以的，但是我们没有做，所以我也不太清楚。嗯，好的，那下一个问题是ae最长可以控制多长片段的精准编辑呢？呃，刚刚我们在文就是在分享中提到，我们最长能够实现一个100兆币的一个复制，但是我觉得还是可以在网上再去探究的，目前我们现在实际的是100兆币，然后你也可以更长，就是跨越卓斯利，或者就是把着丝力的把一个染色体的长臂或者短臂全部进行一个复制。

嗯，好的，感谢老师，那嗯，我们还有倒数几个问题是ae拷贝过程中会不会因为扩增了未知序列而带来一些风险呢？首先就是在刚刚的示意图中，我们也讲到，我们扩增的区域都是我们想要想要扩增的区域，而不是说未知的区域。你看基因组上的这些序列，我想要扩增这段序列对吧？我就在这段序列的两端进行一个space的一个设计，进行靶向的一个编辑，而不是说我扩增的这段序列都是未知的，那么你扩增这段序列带来的一个下游的一个影响，我觉得你知道这段序列它的应用是什么，你就应该能够预测到它下游的影响是什么。

而不是说扩增的是未知的一个序列。其中要说未知的影响吧，我觉得就是这个插入的这一段序列，是我们外援给他引入的，是一个未知的一个状态，但是这个序列是我们自己可以控制的，我们想要它成为什么样的序列，它就成为什么样的序列，所以我认为它不是扩增一个未知的序列啊。好的，老师回答的非常精彩啊，那我们最后一个问题，嗯，是A，有进行体内实验吗？呃，体内实验是指就是把ae系统应用到小鼠体内，我们目前是没有做的，但是我们也在用ae进行一些建模的一些相关的实验。

嗯，就是去把ae系统打到受精卵中，然后去建立相应的小鼠模型。好的，感谢老师，那也最后希望老师和我们分享一下，就是您的这篇文章也是发在了顶开马赛上，有没有一些呃科研的心得和成果，以及投稿过程中有什么呃可以跟大家分享的这种内容吗？或就是给我们科研学子们一起分享一下您的这个心路历程什么的。嗯，其实我们这个文章在发表的过程中其实算是比较坎坷的，我觉得首先我们在发现这个课题的时候就有一些，嗯，就刚开始做的时候就有一些就是现象其实不是很理解，然后也是我们导师想了很久，然后才想，嗯，可能是这样的原因吧，然后再进行验证，到到验证证明了确实是发生了复制，导致了我们的实验结果，然后我们在进行了一系列的往前深究，然后当时我们这个文章也是投到了，先是投到了nature上，然后在返稿的，就在返修的过程中，我们是被抢发了，然后有一个组跟我们做的其实差不多，但是它的设计方面还有一些，呃，后续的研究可能没有那么深入，然后但是当时的对我们的冲击也是比较大的，对我们。

就整个我们这个小团队打击也是非常大的，但后来我们还是就是就擦干眼泪好好干，然后把就是review的问题也就很好的去回答了之后，但是他们还是没有给我们一个。

就是publish这样一个，我们最后又转投了，嗯。我觉得就是，嗯。在科研过程中，特别是在基因编辑领域，竞争还是非常激烈的，还是要抢时间，还是要努力好好干。好的，那非常感谢我们张博接受了我们这次一座论坛的邀请，然后给我们带来了这么精彩的分享，然后也从您的回答中能感受到我们科研科研成果的发表也是非常不容易的，所以也希望大家可以坚持住，那比较重要的一点就是在实验用品选择方面，那也也是希望大家可以一直支持继续选择我们的MCE产品，那本次直播也即将结束了，那也是非常感谢我们嗯，张博给大家带来这次精彩的分享，那给大家在最后介绍一下我们MC内容，我们本次直播就要结束了，那想要观看我们回放的朋友呢，可以关注我们的MCE公众号，在后台回复MC直播可以获得我们的回放链接，也可以直接关注我们MC的视频号，查看我们的直播回放以及在我们官网上可以搜索我们的萌家学堂板块，在右上角活动中心点击萌家学堂，也可以扫描我。

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他的一个讲座，欢迎大家去我们的视频号预约，然后明天中午会给大家实时转播，那我们本次直播就要结束啦，大家再见。