速看！人 BRAK/CXCL14 试剂盒使用步骤

在生物学研究领域，对人胸肾表达趋化因子（BRAK/CXCL14）的研究意义重大，而睿信生物的相关试剂盒为其检测提供了有效途径。以下是详细的操作流程，助你顺利完成实验。

实验前准备

试剂准备：如同开启宝藏箱，从试剂盒中取出已包被抗 BRAK/CXCL14 抗体的酶标板、BRAK/CXCL14 标准品、酶标记物、底物溶液（A 液和 B 液）、洗涤液、终止液。这些试剂如同实验的 “得力干将”，但使用前需先让它们在室温（20 - 25℃）下 “适应环境”，确保实验结果稳定。若洗涤液是浓缩液，务必依照说明书指示，用蒸馏水或去离子水稀释并充分混匀，让其 “发挥最佳性能”。

器材准备：准备不同量程移液器及配套吸头，它们就像实验中的 “魔法吸管”，负责精准移液。移液器需定期校准，保证其 “指哪吸哪”。同时备好离心机、37℃恒温培养箱、酶标仪（能检测 450nm 波长吸光度）。离心机使用前调好 “转速与时间”，酶标仪预热 15 - 30 分钟，使其 “进入最佳工作状态”。

标准品稀释

确定稀释方案：参照试剂盒说明书，如同参考详尽的 “航海图”，明确标准品的稀释倍数与步骤。通常试剂盒提供高浓度标准品母液，需逐步稀释成不同浓度的标准品溶液，为实验搭建 “浓度阶梯”。

进行稀释操作：用移液器精准吸取标准品母液，加入含相应体积稀释液的无菌 EP 管。例如，吸 10μL 标准品母液至 90μL 稀释液，轻柔吹打混匀，实现 10 倍稀释。依此方法，依次得到不同浓度梯度标准品溶液，如 1000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL、31.25pg/mL、0pg/mL（空白对照）。每次稀释后更换吸头，防止 “交叉污染”。

加样

标准品加样：将稀释好的标准品溶液，如同投放 “精准药剂”，依次加入酶标板标准品孔，每孔加 100μL。加样时，移液器垂直悬空于孔上方，缓慢匀速注入，避免产生气泡，保证加样准确。为提高准确性和重复性，每个浓度标准品设 2 - 3 个复孔。

样本加样：将处理后的待测样本（如血清、血浆、细胞培养上清等）加入酶标板样本孔，每孔 100μL。血清样本采集后尽快检测，若不能及时检测，需妥善保存。血浆样本按要求处理后用于检测。加样确保样本无气泡，加样量准确。

温育与洗涤

温育：加样完成，用封板膜密封酶标板，放入 37℃恒温培养箱温育 60 分钟。这 60 分钟如同微观世界的 “化学反应派对”，样本中 BRAK/CXCL14 与包被抗体、酶标记物特异性结合，形成稳定免疫复合物。严格控制温育时间和温度，是保证 “派对顺利进行” 的关键。

洗涤：温育结束，小心揭去封板膜，弃去酶标板液体，倒扣在吸水纸上拍干。每孔加 350μL 洗涤液，静置 1 - 2 分钟，甩去洗涤液后再次拍干。重复此洗涤步骤 5 次，如同给微观世界 “大扫除”，彻底去除未结合物质，为显色反应打造 “干净舞台”。每次洗涤后确保洗涤液充分去除。

显色与终止反应

显色：洗涤完成，每孔先加 50μL 底物 A 液，再加 50μL 底物 B 液，加样避免产生气泡，加完轻轻振荡酶标板混匀。将酶标板放入 37℃恒温培养箱避光显色 15 - 20 分钟。此时，酶标记物催化底物反应，溶液逐渐显色，如同一场 “色彩魔法秀”，颜色深浅与样本中 BRAK/CXCL14 含量成正比。

终止反应：显色时间到，每孔迅速加 50μL 终止液，轻轻振荡混匀，反应随即终止。加入终止液后立即进行吸光度测定，避免时间过长结果偏差，如同及时定格 “魔法秀画面”。

结果测定与分析

酶标仪测定：将酶标仪检测波长设为 450nm，若有双波长功能，同时设参考波长 630nm 以消除干扰。将终止反应后的酶标板平稳放入酶标仪，测定各孔吸光度值（OD 值）。读取数据时保证酶标板位置正确，确保 “数据读取准确”。

数据分析：以标准品浓度为横坐标，对应平均 OD 值（扣除空白对照 OD 值）为纵坐标，用专业软件绘制标准曲线。一般采用四参数拟合曲线方程确保准确性。根据样本平均 OD 值（扣除空白对照 OD 值），在标准曲线上查找对应浓度值，即为样本中 BRAK/CXCL14 含量。若样本检测前稀释，根据稀释倍数校正浓度，得到原始样本中 BRAK/CXCL14 实际浓度。

遵循以上流程，使用睿信生物人胸肾表达趋化因子试剂盒，可确保实验结果准确可靠，为相关研究提供有力支持。