优品生物大鼠单克隆抗体IgG六种亚型鉴定试剂盒操作说明

大鼠IgG单克隆抗体的六种亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3及总IgG）在免疫应答过程中具有重要作用。不同IgG亚型在其补体激活能力、Fc受体结合特性等方面表现出显著差异，因此，抗体亚型的准确鉴定对免疫学研究和抗体功能分析至关重要。

为满足科研工作者的需求，优品生物 推出了大鼠单克隆抗体IgG六种亚型鉴定试剂盒 ，采用经典酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，敏感、快速、特异性强，可应用于单克隆抗体功能研究、疾病模型检测等多种实验场景。以下是这款试剂盒的详细操作说明。

一、试剂盒组成

组分名称规格（96T）说明96孔酶标板（预包被）1块包被高质量特异性抗体用于大鼠IgG六种亚型鉴定。IgG标准品（六种亚型）各1支六种亚型标准品，用于绘制标准曲线。HRP标记二抗1瓶辣根过氧化物酶（HRP）标记的二级抗体，用于发光检测。样本稀释液1瓶用于待测样本和标准品的稀释。浓缩洗涤液（20×）1瓶需稀释为工作液，用于清洗酶标板和去除无关干扰。TMB显色底物1瓶酶促显色溶液，用于信号显现，显蓝色时停止反应。终止液1瓶停止显色反应，溶液颜色由蓝变黄。密封板膜1包避免孵育过程中样本蒸发。操作说明书1份详细指导操作流程。

二、试剂盒适用范围

检测范围 ：IgG六种亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3及总IgG）。

适用样本 ：

血清 ：采集大鼠血液，通过离心分离获取血清。

血浆 ：通过肝素、EDTA等抗凝剂处理血液，离心分离获取血浆。

细胞培养上清 ：用于单抗开发中的抗体鉴定。

应用领域 ：

单克隆抗体研究

疾病模型抗体鉴定

疫苗免疫应答评价

免疫治疗抗体功能分析

三、实验前准备

实验设备 ：

酶标仪（450 nm波长）。

室温孵育箱（37℃）。

高精度移液器及吸头。

蒸馏水或去离子水。

试剂准备 ：

在实验开始前，将所有试剂和样本从冷藏条件中取出，置于室温平衡30分钟（避免温度梯度影响检测结果）。

配制1×洗涤液：将20×浓缩洗涤液按1:20比例稀释（如10 mL浓缩液配成200 mL洗涤液）。

样本处理 ：

根据样本类型对原液进行适当稀释（建议1:10~1:100稀释），稀释倍数根据样本IgG浓度优化。

四、操作步骤

1. 加样

取出试剂盒中的96孔酶标板。

每孔加入50 µL标准品，分别从高浓度到低浓度加入IgG标准品梯度（如2000 ng/mL至31.25 ng/mL，具体浓度参考说明书）。

加入50 µL已稀释的待测样本至样本孔。

控制孔加入50 µL稀释液，以确保空白对照。

2. 孵育

在酶标板上覆盖密封板膜。

将酶标板放置于37℃恒温箱中孵育30分钟。

3. 洗板

使用配制好的1×洗涤液清洗酶标板，每次加入200 µL。

静置10秒后倒出，并用吸水纸轻拍干。

重复清洗5次，以去除未结合的抗体或杂质。

4. 加酶标二抗

每孔加入50 µL HRP标记的酶标二抗。

覆盖密封膜，再次置于37℃恒温孵育30分钟。

5. 再次洗板

重复第3步洗板过程 ，确保孔内清洁，以减少背景干扰。

6. 显色反应

每孔加入50 µL TMB显色底物，避光显色10~15分钟，溶液呈蓝色。

实时观察颜色变化，避免显色过度。

7. 终止反应

每孔加入50 µL终止液，溶液颜色由蓝变黄。

显色完成后立即读取数据。

8. 数据检测

在酶标仪上选择450 nm波长读取每孔的OD值：

使用标准品绘制标准曲线（浓度-吸光值）。

根据标准曲线计算未知样本的IgG亚型浓度。

五、数据分析

绘制标准曲线 ：

以标准品浓度为横坐标，OD450值为纵坐标，绘制标准曲线。

大多数情况下，曲线呈现线性或四参数曲线。

计算样本结果 ：

将待测样本的OD值代入标准曲线公式，计算出实际浓度。

如果样本浓度超出绘制范围，建议稀释后重新检测。

六、注意事项

实验控制 ：

确保每次操作一致性，避免样本和试剂交叉污染。

空白对照孔的吸光度值用于评估背景噪声。

洗板彻底 ：

洗板过程需要仔细操作，未清除的残液会直接影响显色结果。

显色时间控制 ：

显色时间过长或过短会引起结果差异，建议严格执行实验说明中的时间要求。

注意试剂保存 ：

酶标板、显色液应避免光照，所有试剂应在2~8℃条件存储。

七、优势特点总结

全覆盖六种亚型 ：一次实验轻松检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3及总IgG。

灵敏度与特异性高 ：能够准确检测低浓度的IgG（最低检测限ng/mL级别）；不发生非特异性交叉反应。

实验操作简便 ：标准化流程，2小时内完成全部检测。

应用范围广泛 ：适用于多种样本类型及实验环境。

高性价比 ：为科研用户节省时间成本和经济开销。

八、储存与有效期

储存条件 ：

未开封时将试剂盒储存在2-8℃冷藏环境。

使用后未耗尽的酶标板需重新密封保存，避免水汽等影响。

有效期 ：

产品有效期以试剂盒外包装标识为准，避免使用过期试剂。

九、结语

优品生物的大鼠单克隆抗体IgG六种亚型鉴定试剂盒为免疫学研究和抗体功能分析提供了一种高效、可靠的解决方案。这款试剂盒的优势在于快速、灵敏和操作便捷，是抗体研发、疫苗评价以及疾病相关研究的不二选择。