小鼠白细胞介素 1β（IL-1β）ELISA KIT 科普解读

在科研微观世界里，小鼠白细胞介素 1β（IL-1β）ELISA KIT 是个超厉害的工具，专门用来探测小鼠体内的 IL-1β 浓度。现在，就来详细了解一下这个神奇的试剂盒吧！

一、基础信息

规格与保质期：这款试剂盒有 96T 和 48T 两种规格，保质期是 6 个月，具体时长看试剂盒外面的标签。

用途：它能在体外精确测量血清、血浆或其他生物液体里小鼠 IL-1β 的浓度。不过要注意，它只适用于科研，绝对不能用于临床诊断。

性能特点：灵敏度超高，能检测到低至 0.1pg/ml 的 IL-1β。而且特异性很强，只对小鼠 IL-1β 有反应，和其他类似物质基本不会混淆。重复性也很棒，不管是在同一块板子上（板内），还是不同板子间（板间）进行检测，变异系数都小于 10%。检测范围在 3.75pg/ml - 120pg/ml 。

二、检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法，就像一场精心策划的 “分子抓捕行动”。首先，把抗小鼠 IL-1β 抗体 “布置” 在酶标板上，这就好比在一个特殊的 “场地” 设好了陷阱。当实验开始，样品或标准品里的小鼠 IL-1β 就像 “目标分子”，会主动和这些抗体结合。接着，加入辣根过氧化物酶标记的抗体，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体的 “组合体”。反应结束后，通过洗板把那些没参与反应的 “闲散分子” 都冲洗掉。然后加入显色底物 (TMB)，在辣根过氧化物酶这个 “神奇魔术师” 的作用下，TMB 会变成蓝色，再加终止液，就变成黄色啦。神奇的是，颜色越深，说明样品里的小鼠 IL-1β 含量越多。最后，用酶标仪在 450nm 波长下测量吸光度（OD 值），通过这个数值就能算出样品中 IL-1β 的浓度。

三、实验必备器材

使用这个试剂盒，还需要准备一些东西：

能在 450nm 波长工作的酶标仪，它就像一个精准的 “数据读取器”。

不同量程的高精度加样器及配套枪头，像 0.5 - 10uL、2 - 20uL、20 - 200uL、200 - 1000uL ，它们是加样的 “得力助手”。

37℃恒温箱，给实验提供一个稳定的 “温度小窝”。

蒸馏水或去离子水，在实验中用途多多。

四、检测前准备

平衡处理：提前 1 小时把试剂盒和样本从冰箱拿出来，让它们在室温下 “适应环境”。

洗涤液准备：从冰箱拿出来的浓缩洗涤液要是有结晶，别担心，这是正常现象。把它放在室温下，轻轻摇晃，等结晶完全溶解后再配制洗涤液。比如，把 20ml 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释成 400ml 能用的洗涤液，没用完的要放回 4℃保存。20× 洗涤缓冲液按 1：20 用蒸馏水稀释，也就是 1 份 20× 洗涤缓冲液加 19 份蒸馏水。

五、样品收集方法

血清：全血样品在室温放 2 小时，或者在 4℃放一晚上，然后用 2000prm 的转速离心 20 分钟，取上面那层清液就能检测，装血的试管得是一次性没有内毒素的。

血浆：推荐用 EDTA 钠盐当抗凝剂，样品采好后 30 分钟内，用 2000prm 的转速离心 15 分钟，取上清液检测，千万别用溶血和高血脂的样品。

组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M，pH = 7.4) 把组织洗干净，去掉残留的血，称好重量后把组织剪碎。按照 1:9 的比例（比如 1g 组织就加 9mL PBS，这个比例可以根据实验情况调整，但要记好），把剪碎的组织和 PBS（最好加点蛋白酶抑制剂）放到玻璃匀浆器里，在冰上使劲研磨。要是想让组织细胞破碎得更彻底，还可以对匀浆液进行超声破碎或者反复冻融。最后用 5000prm 的转速离心 5 - 10 分钟，取上清液检测。

细胞提取液：贴壁细胞先用冷的 PBS 轻轻洗，再用胰蛋白酶消化，然后用 2000prm 的转速离心 5 分钟收集细胞；悬浮细胞直接离心收集就行。收集到的细胞用冷的 PBS 洗 3 次，每 1×106 个细胞加 150 - 200μL PBS 重新悬浮起来，通过反复冻融让细胞破碎（要是含量少，PBS 可以少加点）。把提取液用 2000prm 的转速离心 10 分钟，取上清液检测。

细胞培养上清或其他生物体液：用 2000prm 的转速离心 20 分钟，去掉杂质和细胞碎片，取上清液检测。

六、样品注意事项

保存要点：样品要是 1 周内就检测，放在 4℃就行；要是不能马上测，就按每次用的量分开装，冻在 - 20℃以下，千万别反复冻融。还有，溶血的样品不能用来检测，结果会不准。

浓度处理：试剂盒能检测的浓度范围和样本实际的浓度范围可能不一样，要是样品里要检测的东西浓度比标准品最高值还高，就得根据实际情况稀释，最好先做个预实验，看看稀释多少倍合适。

其他问题：用化学裂解液做组织匀浆或细胞提取液，可能会因为加了化学物质，让 ELISA 测的值不准。还有，有些重组蛋白可能和试剂盒里的抗体不 “匹配”，就检测不出来。

七、操作步骤

确定板条数量：算算这次实验要用多少预包被板条，把要用的拿出来放在 96 孔框架里，剩下的放回铝箔袋封好，存到 4ºC。

平衡：试剂盒和样本在室温 (25 - 28ºC) 下待 1 小时，让它们充分达到室温。

设置孔位：把标准品孔、样本孔和空白孔设置好。

加样操作：标准品孔每个加不同浓度的标准品 50μL；样本孔加待测样本 50μL（要是需要可以先稀释）；空白孔加样本稀释液 50μL。

温育反应：所有孔里每孔加辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜把反应孔封好，放在 37℃水浴锅或恒温箱里温育 45min。

洗板环节：把液体倒掉，在吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），等 20s，再把洗涤液甩出去，在吸水纸上拍干，这样重复洗 5 次，也可以用洗板机洗。

显色步骤：每孔加底物 A、B 各 50μL，在 37℃避光的地方放 15min。

终止与读数：每孔加终止液 50μL，15min 内，用酶标仪在 450nm 波长处测各孔的 OD 值。

八、结果计算

数据处理：标准品和样本要是设了复孔，就把它们的平均值算出来。

绘制曲线：把标准品的浓度当成纵坐标，O.D. 值当成横坐标，画出标准曲线（怎么画最好，要看回归方程算出来的 R2 值，R2 越接近 1 越好）。

浓度计算：通过样品的吸光度值和标准曲线（可以用直线拟合或者 4 参数拟合），算出样品的浓度（工作人员能提供算浓度的软件）。要是样品之前稀释过，就得把算出来的浓度乘以稀释倍数，这才是样品真正的浓度。