Lonza 电转条件优化指南

本期我们将为您提供优化 4D-Nucleofector X 单元的 Nucleofection 条件的指南，及有关该主题的常见问题。

Q:Nucleofector I 或 II 条件是否与 4D-Nucleofector X 单元兼容？

4D-Nucleofector 系统基于升级后的 Nucleofector 技术，并具有以下主要改进：

两种 Nucleofection 体系(20ul和100ul)，且实验条件可以互相转移

Nucleocuvette 由导电聚合物而非铝组成，提高了细胞活力

简化的 4D-Nucleofector 试剂

更广泛的程序来微调您的优化

由于这些差异，为 Nucleofector I 或 II 设备推荐的解决方案对 4D-Nucleofector 系统无效。然而，在 4D-Nucleofector X 单元上运行优化是一个潜在改善 Nucleofection 结果的绝佳机会。

Q我可以优化哪些参数？

在 Nucleofection 优化中，最重要的参数是 Nucleofector 试剂和程序。

Q我应该使用什么底物进行优化？

无论您感兴趣的底物（质粒、siRNA、蛋白质或化合物）如何，我们始终建议使用我们的 pmaxGFP 载体进行优化。使用 pmaxGFP Vector 进行优化消除了许多变量，例如底物制备的性质和质量以及分析时间。

Q我应该以什么 Nucleofection 体系进行优化？

4D-Nucleofector X 单元旨在简化优化步骤。我们建议使用 20 μl Nucleocuvette Strips 进行优化，减少珍贵细胞的消耗。确定最佳条件后，您可以使用相同的方案，通过将细胞数量和底物数量乘以 5 来简单地切换到 100 μl Nucleocuvette。

Q如何优化 4D-Nucleofector X 单元上的 Nucleofection 条件？

首先我们将访问Lonza 开放的数据库，http://knowledge.lonza.com查找相关程序及方案。

当您的细胞没有推荐的方案时，将适用以下三种情况之一：

如果没有任何可用的建议，则开始第一轮优化。几种 Nucleofector 试剂（原代细胞的 P1 至 P5 和细胞系的 SE、SF 和 SG）中的每一种都将使用 15 个不同的程序进行测试。

遵循基本的 4D-Nucleofector X 单元方案（如果有）。使用少量的程序 (6–7个) 测试一个或两个 Nucleofector 试剂。

数据库描述了 4D-Nucleofector X 单元的 Nucleofection 条件和数据。您可以选择测试它们或返回前两个选项之一。

Q如何进一步改善我的 Nucleofection 条件？

一旦从第一轮优化中获得 Nucleofection 的结果，您可以使用我们基于 Web 的优化表格请求我们的反馈

参考下方的优化策略，可能会改善您的 Nucleofection 结果

在表格中选择效果最好的初始程序（例如 DN-100）。表格中间垂直列出的是第一轮优化中描述的 15 个程序。

使用所选程序左侧的程序来提高细胞活力（例如 DH-100）。使用右侧的程序来提高转染效率（例如 ER-100）