百萤课堂之酪胺

Tyramide

01. 酪胺概述

 酪胺，英文：Tyramide，酪胺是用来放大荧光信号的染料。酪胺信号放大（TSA）是一种通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。为了让您的实验更清晰，我们研发了Styramide的染料，这系列染料是Tyramide的替代品，性能比Tyramide更好。与Tyramide试剂相比，Styramide 缀合物具有标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。Styramide 偶联物还可以减少一抗的消耗。

Tyramide

02. 酪胺工作原理

 常见的一些染料，如iFluor,AF,花青素,荧光素，生物素（生物素与前几个不同）等等，这些染料都是用来标记抗体、蛋白的染料。也就是通过不同的基团（NHS酯，马来酰亚胺等），将染料和抗体标记到一起，接着将标记好荧光染料的抗体再加入到细胞内，用荧光显微镜或者其他成像的仪器检测，可以发出荧光。

 但是，有些实验比较苛刻或者荧光拍起来很弱（排除染料的原因），于是就开发出了酪胺这种基团，用来放大荧光信号，怎么放大呢？小萤找了几张图来解释下。简单来说，图1可以理解为一个荧光染料或者几个荧光染料分子标记在一个抗体上。而酪胺的作用是，让抗体上插满了荧光染料的分子。就比如：一间房子里，开一个灯，有点暗，那就开十个灯，那就更亮了。荧光信号放大，就是这个意思。

图1.iFluor488活化酯染料的活化酯和抗体上的伯胺反应，形成荧光标记好的抗体

图2.酪胺作用后的抗体上插满了荧光染料的分子

Tyramide

03. 酪胺染料标记抗体的过程

酪胺染料的反应，需要以下四个步骤：

1.酪胺染料，如：iFluor 488酪胺

2.辣根过氧化物酶（HRP）及过氧化氢

3.二抗

4.细胞或组织样品，抗原

酪胺是一个很稳定的基团，如果直接把它加入到含有抗体的细胞或组织中，它并不会反应，更别说要让抗体插满染料。所以，需要用到一个酶（HRP），HRP会和酪胺染料反应，让染料具有活性（HRP和酪胺的反应有前提条件，这个涉及到反应的顺序）。具有活性的酪胺染料就会结合到二抗的酪氨酸残基上，拍照就能看到荧光了。

为了让大家更清楚的理解这个过程，特此引用一个日常生活中的实物：灯泡。

1.酪胺染料，它就相当于一个灯泡（不含螺纹）；

2.HRP及过氧化氢就相当于一个可以给灯泡制作出螺纹的工具；

3.二抗相当于灯泡的底座；

4.细胞或组织相当于一个电源。

用正确的顺序形容一下这个实验。（这个顺序非常重要，如果顺序错误，实验会失败）

1.将制作螺纹的工具连接到灯泡底座上（HRP和二抗反应，生成HRP-二抗）

2.将连接了制作螺纹工具的灯泡底座连接到电源上（将HRP-二抗标记到细胞或者组织上）

3.将没有螺纹的灯泡连接到2上（将酪胺染料标记到已经标记好HRP-二抗的细胞或组织上）

注意：酪胺这类染料，不能用于活体成像。