细胞冻存——让你的细胞“长生不老”

《星际穿越》电影中提到漫长的太空旅程中，宇航员可以进入休眠水床休眠，并自行设定唤醒时间。在《异形》《深空失忆》《三体》等科幻作品中，都出现此类技术。《三体》中，休眠后来成为人类最普遍的一项技术。技术上的人类低温休眠，是指在极短的时间内，将人冷冻在零下196摄氏度的环境中，让细胞停止活动，无限延长生命周期。从理论上来讲，低温休眠是可以做到，但是就目前的技术而言，人类还是不能做到唤醒功能。

流浪地球中的“休眠仓”

但是科幻电影中将冻存若干年的生命体重新解冻复活的情节在生命科学研究过程中每一天都在上演，实验人员往往将细胞用特殊配置的细胞冻存液保存于-196℃的液氮，使得细胞暂时脱离生长状态，等到实验需要的时候再从液氮中取出复苏。

那么细胞为什么要“休眠”呢？细胞传代过多会出现变异情况，状态会变差转染效率会变低，需要进行更新；可能我这段时间细胞生长状态很好，长的又快又多，可我又没那么多实验要做，就可以冻一些，等以后再用；或者，我做实验“有毒”，好不容易把细胞养的又好又多，万一不冻存一点，细胞挂掉之后我也就“挂掉了”......诸如此类的原因有很多很多，那这个时候就需要将细胞进行冻存了。

那么常见的细胞冻存方法有以下三种：

程序性梯度降温：根据文献报道，细胞以1℃/min的速度冷冻存活率最高，因为在细胞冻存时，内部会产生晶体，而这一速度能够很好的控制细胞内部晶体的产生，防止水凝固形成的高浓度溶液对细胞造成损伤。但实际操作中不可能人为的将速度控制的如此准确，因此目前的方法是4℃ 30min、-20℃ 1h30min、-80℃ 16-18h后转入液氮保存。

程序性降温盒：使用前从-80℃冰箱拿出置于室温平衡10min以上，然后直接把冻存管放入降温盒中，随后置于-80℃冰箱即可。市面上常见的降温盒有两种即需要添加异丙醇和不需要添加异丙醇，需要添加异丙醇的降温盒一般使用3-5次后需要更换或者加新的异丙醇再继续使用。

程序性降温盒

程序性降温盒

厚泡沫箱法：如果实在上述两种冻存方法都不能实现，也可以次用厚壁的泡沫塑料盒，在其中塞入大量干棉花，使其在-80℃缓慢降温，达到细胞冻存的目的。

程序性梯度降温法在实验室中较为常用，但由于各步骤的时间要求比较严格，可能会出现由于事情过多而忘记转移冻存管的现象导致失败；程序性降温盒操作简便，但价格较贵并且需要及时添加异丙醇；厚泡沫箱法，简单又便宜，但会占用实验室-80冰箱的大量空间（有没有空间放都不一定）。

博奥龙QuickFreezing系列细胞冻存液具有以下优点：

1.细胞用QuickFreezing 细胞冻存液吹打悬浮后，装入冻存管，直接放入-80度冰箱长期保存，无需程序降温，无需使用程序性降温盒。仅需较小的-80度冰箱空间，即可冻存细胞，不占冰箱空间；

2.无血清，无蛋白，化学组成明确；

3.不含牛血清或其他蛋白成分，不会引入造成细胞种子污染的外源因子；

4.不含牛血清或其他蛋白成分，非常适合用于冻存在使用常规牛血清冻存液过程中容易聚团的细胞，如293细胞；

下次我们再来聊一聊细胞冻存、复苏中的一些注意事项吧~