大家在刚接触细胞实验时,是否经常混淆细胞增殖、细胞活力与细胞毒性这三个概念?三者检测原理有相似之处,但核心用途与应用场景截然不同;选对方法才能让实验数据精准有效!小 E 一次性梳理完毕,帮你全面覆盖实验需求。
① 细胞活力:是指存活细胞占总细胞的比例,台盼蓝实验是最经典细胞死活判断方法,而ATP法/CCK-8/MTT/MTS等细胞活力检测是通过细胞本身代谢活性来间接表示细胞活力[1, 2]。
② 细胞增殖:是指存活细胞的分裂能力或DNA合成的情况,可通过BrdU/EdU方法检测[3]。
③ 细胞毒性:外界因素(药物、试剂、环境等)对细胞造成损伤或死亡的程度,例如乳酸脱氢酶法测细胞毒性。
举个例子让大家清楚了解三种检测方法之间的区别:
抗癌药物筛选场景
细胞状态情况 | 结果 |
|---|---|
高毒性,低活力,低增殖 | 药物存在细胞毒性(需优化浓度或筛选更特异性靶点) |
低毒性,活力正常,低增殖 | 药物特异性抑制增殖(理想候选药物) |
低毒性,高活力,高增殖 | 药物无效,癌细胞快速增殖 |
检测方法 | 适用仪器 | 核心原理 | 检测时间 | 特点 |
|---|---|---|---|---|
ATP法 | 多功能酶标仪(具备化学发光检测功能) | 基于荧光素-荧光素酶体系,检测活细胞内 ATP 含量,发光强度与活细胞数量呈线性正相关。 | 10-20 min | 实验周期短,高灵敏度,专用化学发光检测设备,不适用于普通酶标仪。 |
CCK-8法 | 酶标仪 | WST-8在细胞内脱氢酶作用下生成水溶性甲臜,吸光度与活细胞数量呈正相关。 | 2-5 h | 操作简单,无需溶解步骤,对细胞毒性低。 |
MTT法 | 酶标仪 | 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为蓝紫色甲瓒结晶,吸光度与活细胞数成正比。 | 2-5 h | 灵敏度高,需溶解结晶步骤。 |
Calcein-AM/PI 法 | 流式细胞仪 / 荧光显微镜 | Calcein-AM 标记活细胞(绿色荧光),PI 标记死细胞(红色荧光)。 | 40-60 min | 可区分活细胞和死细胞,适合多参数分析。 |
台盼蓝染色法 | 显微镜 | 台盼蓝无法穿透活细胞膜,死细胞被染成蓝色。 | 10-15 min | 通量低;准确性依赖人工计数。 |
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→ 细胞活力化学发光法测试盒(E-BC-F200),ATP法定量,精准又快捷!
产品检测原理:利用荧光素酶与ATP、荧光素的特异性酶促发光反应,且发光强度与 ATP 浓度呈严格的线性正相关,结合活细胞内的ATP含量与细胞活力的正比关系,实现对活细胞ATP的精准定量。
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产品检测原理:在电子载体存在的情况下,WST-8 被线粒体内的脱氢酶还原生成水溶性的橙黄色formazan,生成的formazan量与活细胞数量成正比,通过检测在450 nm处的吸光度,可以间接计算活细胞的量。
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 适用仪器 | 应用 |
|---|---|---|---|---|
E-BC-F200 | 细胞活力化学发光法测试盒 | 48T/96T | 化学发光检测仪/多功能酶标仪 | 细胞活力 |
E-CK-A362 | 增强型细胞活力检测试剂盒(CCK-8) | 100Tests/500Tests | 酶标仪 | 细胞活力/细胞增殖/细胞毒性 |
检测方法 | 适用仪器 | 核心原理 | 检测时间 | 特点 |
|---|---|---|---|---|
LDH释放法 | 酶标仪 | 细胞膜破裂释放 LDH 到培养液中,通过比色法检测 LDH 活性反映细胞毒性。 | 60-90 min | 可能受细胞培养血清干扰。 |
荧光素酶报告基因法 | 化学发光检测仪 / 多功能酶标仪 | 萤火虫荧光素被细胞膜破碎释放的萤火虫荧光素酶催化氧化生成氧化荧光素并发出黄绿色光。 | 25 min | 高灵敏度,但需要构建报告基因体系。 |
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产品检测原理:乳酸脱氢酶催化乳酸和NAD+反应产生丙酮酸和NADH,NADH在PMS作用下,将电子传递给WST-8,产生黄色的产物,其在450 nm有特征吸收峰,从而可以通过比色法来定量乳酸脱氢酶的活性。
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 适用仪器 | 应用 |
|---|---|---|---|---|
E-BC-K771-M | 乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性比色法测试盒 | 96T | 酶标仪 | 细胞毒性 |
E-BC-F074 | 双荧光素酶报告基因化学发光法测试盒(辉光型) | 48T/96T | 多功能酶标仪 | 细胞毒性,分子实验 |
检测方法 | 适用仪器 | 核心原理 | 检测时间 | 特点 |
|---|---|---|---|---|
MTS 法 | 酶标仪 | MTS 被细胞内脱氢酶还原为水溶性甲臜,吸光度与活细胞增殖活性呈正相关。 | 3-7 h | 灵敏度低于 CCK-8和 WST-1法。 |
BrdU 荧光法 | 流式细胞仪 | BrdU 掺入增殖细胞新合成的 DNA 中,通过荧光标记抗体结合 BrdU,荧光强度反映增殖活性。 | 12-36 h | 样本需强酸、强碱或蛋白酶K处理。 |
EdU 荧光法 | 多功能酶标仪(具备化学发光检测功能)/流式细胞仪 | EdU 掺入增殖细胞新合成的 DNA 中,通过点击化学反应使荧光染料与 EdU 结合,荧光信号反映增殖活性。 | 5-18 h | 样本无需处理,适用于新鲜组织、细胞爬片或冰冻切片。 |
DNA 含量流式分析(PI 染色法) | 流式细胞仪 | PI 穿透细胞膜嵌入 DNA 双链,荧光强度与 DNA 含量成正比,通过细胞周期分布(G1/G0、S、G2/M 期)反映增殖活性。 | 2-3 h | 无法区分活跃增殖与静止期细胞,需结合其他标记。 |
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 适用仪器 |
|---|---|---|---|
E-CK-A341 | MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 | 500 Assays/1000 Assays | 酶标仪 |
E-CK-A370 | E-Click EdU Cell Proliferation FlowCytometry Assay Kit (Green, FITC) | 50 Assays/200 Assays | 流式细胞仪 |
E-CK-A371 | E-Click EdU Cell Proliferation FlowCytometry Assay Kit (Green, Elab Fluor® 488) | 50 Assays/200 Assays | 流式细胞仪 |
E-CK-A373 | E-Click EdU Cell Proliferation FlowCytometry Assay Kit (Red, Elab Fluor® 647) | 50 Assays/200 Assay | 流式细胞仪 |
E-CK-A375 | E-Click EdU Cell Proliferation ImagingAssay Kit (Green, FITC) | 50 Assays/200 Assays | 荧光显微镜 |
E-CK-A376 | E-Click EdU Cell Proliferation ImagingAssay Kit (Green, Elab Fluor® 488) | 50 Assays/200 Assays | |
E-CK-A377 | E-Click EdU Cell Proliferation ImagingAssay Kit (Red, Elab Fluor® 594) | 50 Assays/200 Assays | |
E-CK-A378 | E-Click EdU Cell Proliferation ImagingAssay Kit (Red, Elab Fluor® 647) | 50 Assays/200 Assays |
这份超全的细胞状态检测指南有没有帮你理清了实验思路?如果你在方法选择、操作细节或结果解读上还有任何疑问,或者想深入了解某一种技术的实战技巧,欢迎在评论区留言~小E会持续为大家带来更多清晰、实用的科研干货,陪你一起轻松做实验、稳稳出数据!
参考文献:
[1] Stoddart, Martin J. Mammalian cell viability : methods and protocols[M]. 2011.
[2] Gilbert D F, Friedrich O. ell Viability Assays[J]. Methods in Molecular Biology, 2017. DOI:10.1007/978-1-4939-6960-9.
[3] Ma Y, Liu E, Fan H, et al. RBM47 promotes cell proliferation and immune evasion by upregulating PDIA6: a novel mechanism of pancreatic cancer progression[J]. Journal of Translational Medicine, 2024, 22(1). DOI:10.1186/s12967-024-05970-6.
原创声明:本文系作者授权腾讯云开发者社区发表,未经许可,不得转载。
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