【免疫学实验】“Western Blot”的前世今生:免疫印迹技术简述

在生物医学实验室中，免疫印迹（Immunoblotting），也就是大家耳熟能详的 Western Blot（WB），是一项不可或缺的“明星技术”。

它与我们之前介绍的免疫沉淀（IP）技术一样，都是为了鉴定细胞裂解液中的特定蛋白质。但相比于IP，WB有着独特的优势。

⚖️ 一、 为什么选择免疫印迹？

免疫沉淀通常需要利用放射性同位素标记细胞，这对于实验条件和安全性都有较高要求。

而免疫印迹技术巧妙地避开了这一难题。它不需要对细胞进行放射性标记，而是通过“分离-转移-检测”三部曲来锁定目标蛋白。

核心流程如下：

1. 分离： 将未标记的细胞在去污剂中裂解，利用 SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）根据分子量大小将裂解液中的蛋白质分离开来。
2. 转移（印迹）： 电泳结束后，将凝胶中的蛋白质通过电转印技术，转移到一种稳定的固相载体（通常是硝酸纤维素膜或PVDF膜）上。
3. 检测： 这一步与免疫荧光或ELISA类似。利用特异性抗体去寻找膜上的目标蛋白，再通过酶标记的二抗来放大信号，最终呈现出我们能看到的条带。

❓ 二、 为什么叫“Western”？

你可能会好奇，为什么这项检测蛋白质的技术会被命名为“Western”（西方）？

这其实是一个充满科学趣味的“命名故事”：

• 源头： 最早，英国科学家 Edwin Southern 发明了检测特定 DNA 序列的技术，被命名为 Southern blot（Southern 印迹）。
• 延伸： 随后，科学家们发明了检测 RNA 的技术。为了向 Southern 致敬，同时也为了体现技术上的关联性，这项技术被戏称为 Northern blot（Northern 印迹，北方）。
• 诞生： 当根据分子量大小分离蛋白质的印迹技术出现时，顺理成章地，它就被命名为 Western blot（Western 印迹，西方）。

这一命名逻辑也体现了分子生物学中心法则（DNA -> RNA -> 蛋白质）在技术命名上的巧妙映射。

🏥 三、 广泛的应用场景

免疫印迹技术因其特异性高、结果直观，在基础研究和临床诊断中都有着广泛的应用。

• 🔬 基础研究： 用于验证特定蛋白的表达量、分子量以及翻译后修饰情况。
• 🩺 临床诊断： 常用于检测血清中的特定蛋白质或抗体。
  • 典型案例： 在 HIV（艾滋病病毒） 的确诊检测中，Western Blot 是一种经典的确认试验。它能够检测患者血清中是否存在针对 HIV 不同成分（如衣壳蛋白、酶等）的特异性抗体，从而提供确凿的诊断依据。

总结从 DNA 的 Southern 印迹，到 RNA 的 Northern 印迹，再到蛋白质的 Western 印迹，这一系列技术构成了分子生物学研究的基石。掌握 Western Blot，你就拥有了一把打开蛋白世界大门的钥匙。