实体瘤 CAR-T 研究瓶颈？Elabscience 高纯度初始 T 细胞分选试剂盒来破局

CAR-T (Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy)，即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。该疗法在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤等血液肿瘤疾病的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。但在实体瘤的治疗中依然存在着抗原异质性、免疫抑制微环境、细胞衰竭等障碍。

当前CAR-T细胞的种子来源主要有初始T细胞与总T细胞两类，二者在组学分析、细胞模型构建及细胞增殖能力三大核心维度存在显著差异。组学分析方面，初始T细胞可直接用于研究“初始状态”与“活化状态”T细胞的转录组差异，而总T细胞因属于已分化群体而无法细分至下游特定细胞亚群，在精细化研究中存在局限；细胞模型构建方面，未活化的初始T细胞能被高效诱导为各类效应细胞，模型效果更优且稳定性更强，总T细胞因包含已分化的效应T细胞会干扰模型稳定性，例如样本中Th1细胞占比过高时，其对Th2细胞的抑制作用会导致Th2细胞模型构建效果不稳定；细胞增殖能力方面，初始T细胞在细胞疗法研究场景中的增殖能力显著优于总T细胞，总T细胞增殖能力相对较弱。综合来看，高纯度的初始T细胞是CAR-T细胞研究的最优种子细胞来源。

高质量的初始T细胞分选方案主要通过获取更"年轻"、更具潜力的T细胞亚群来突破现有CAR-T疗法的瓶颈，其意义体现以下方面：一是提升疗效，以干细胞样记忆T细胞（Tscm）为代表的初始T细胞寿命长，可分化为效应细胞，能解决CAR-T在实体瘤和长效性上的挑战；二是保证安全，高纯度分选避免耗竭T细胞等污染，降低细胞因子释放综合征（CRS）、神经毒性风险，并为基因编辑通用型CAR-T（如敲除SPPL3基因）减少移植物抗宿主病（GvHD）提供基础。

初始T细胞的分选已不仅仅是CAR-T研究的准备步骤，更是主动优化产品性能、推动技术迭代的关键环节。随着分选技术的不断精进和对T细胞亚群认知的深化，未来将能设计出更具战斗力、作用更持久的活细胞药物，造福更多患者。

Elabscience®全新推出的人naive Pan(CD3)/CD4/CD8 T细胞阴性分选试剂盒，采用磁珠阴性分选技术，无需直接标记人naive Pan(CD3)/CD4/CD8 T细胞，避免抗体结合导致的细胞激活或表位遮蔽，保留细胞天然状态，为后续CAR-T细胞的体外研究（定向分化）和体内研究（过继疗法）提供更可靠的支持！

产品内容

Elabscience®人naive Pan(CD3)/CD4/CD8 T细胞阴性分选试剂盒通过阴性分选法从新鲜人外周血PBMC细胞样本中分离出naive Pan(CD3)/CD4/CD8 T细胞。本试剂盒的原理是选用不同的生物素（biotin）标记单克隆抗体对非目的细胞（非naive Pan(CD3)/CD4/CD8 T细胞）进行标记，而后通过链霉亲和素标记的磁珠对非目标细胞进行清除，从而达到分离人外周血PBMC细胞naive Pan(CD3)/CD4/CD8 T细胞的目的。它可以保持目的细胞未受刺激的原始状态，得到的细胞不带有任何抗体和磁珠标记，可直接进行下游应用。该系列产品主要为以下内容：

产品优势

1. 样本无需裂红处理，细胞活性更有保证。
2. 无刺激，分选目的细胞无抗体和磁珠标记，细胞状态不受影响。
3. 纯度高，分选后细胞纯度大于95%。
4. 无需分离柱进行分离。
5. 实验耗时短，最快15分钟可完成阴性细胞分选。
6. 可用于新鲜人PBMC样本或冻存PBMC样本。

结果展示

图1. 如上图所示，人PBMC细胞使用EasySortTM Human Naïve Pan T Cell Isolation Kit（MIH006N）分选初始Pan T细胞后用Elab Fluor® Violet 450 Anti-Human CD3 Antibody[17A2]（E-AB-F1001Q）、PE Anti-Human CD45RA Antibody[HI100]（E-AB-F1052D)、APC Anti-Human CD45RO Antibody[UCHL1]（E-AB-F1139E）和FITC Anti-Human CD197/CCR7 Antibody[G043H7]（E-AB-F1159C）等抗体染色并进行流式细胞术分析，分选前后人初始Pan T细胞CD3+CD45RA+CD45RO-CD197+的细胞纯度分别为6.0%和95.2%。

图2. 如上图所示，人PBMC细胞使用EasySortTM Human Naïve CD4+ T Cell Isolation Kit（MIH007N）分选Naïve CD4+T细胞后用APC Anti-Human CD3 Antibody[OKT-3]（E-AB-F1001E）、PE Anti-Human CD4 Antibody[RPA-T4]（E-AB-F1109D）、FITC Anti-Human CD45RO Antibody[UCHL1] （E-AB-F1139C）和PE/Cyanine7 Anti-Human CD45RA Antibody[HI100]（E-AB-F1052H）等抗体染色并进行流式细胞术分析，分选前后人初始CD4+T细胞CD3+CD4+CD45RA+CD45RO-的细胞纯度分别为18.49%和96.28%。

图3. 如上图所示，人PBMC细胞使用EasySortTM Human Naïve CD8+ T Cell Isolation Kit（MIH008N）分选Naïve CD8+T细胞后用PE/Cyanine7 Anti-Human CD8a Antibody[OKT-8]（E-AB-F1110H）、FITC Anti-Human CD56/NCAM Antibody[5.1H11]（E-AB-F1239C）、FITC Anti-Human CD57 Antibody[HNK-1]（E-AB-F1067C）、FITC Anti-Human CD45RO Antibody[UCHL1]（E-AB-F1139C）、APC Anti-Human CD45RA Antibody[HI100]（E-AB-F1052E）、PE Anti-Human CD197/CCR7 Antibody[G043H7]（E-AB-F1159D）等抗体染色并进行流式细胞术分析，分选前后人初始CD8+T细胞CD56-CD57-CD45RO-CD8+CD45RA+CD197+的细胞纯度分别为8.4%和95.4%。

图4. 人外周血PBMC使用Human CD3/CD28 T Cell Activation Beads（MIH001A）激活培养2天后检测激活前后CD69和CD25表达。

图5. 分选人外周血CD3+T细胞后染色CFSE（E-CK-A345），使用Human CD3/CD28 T Cell Activation Bead激活培养3天，检测未激活组和激活组T 细胞的增殖。

图6. 人外周血使用人单个核细胞分离液（P 1.077）（E-CK-A103）分离PBMC细胞后，经刺激阻断剂激活后检测Th1/Th2细胞分泌细胞因子的功能和比例。

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