文献分享--肿瘤引流淋巴结中TLR4依赖性成纤维细胞-单核细胞轴促进三阴性乳腺癌转移

作者，Evil Genius

今天我们分享单细胞空间多组学文献。

知识积累

肿瘤引流淋巴结（TDLNs）既是抗肿瘤免疫启动的场所，也是转移灶形成的部位。

与其他乳腺癌亚型相比，三阴性乳腺癌（TNBC）具有更高的复发或转移风险。

初始CD8+ T细胞在淋巴结（LNs）中被激活后，迁移至肿瘤微环境，并通过树突状细胞（DC）的共刺激作用获得效应功能。

三阴性乳腺癌（TNBC）转移导致约70%的乳腺癌相关死亡，且淋巴结转移是远处转移的重要预测指标。

淋巴结内存在高度有序的细胞网络，包括成纤维网状细胞（FRCs）等基质细胞，它们通过与T、B细胞相互作用启动有效免疫应答。在肿瘤背景下，这些基质细胞可被重编程以支持转移前微环境形成。

结果1、侵袭性TNBC小鼠模型的肿瘤引流淋巴结中存在PD-L1+单核细胞

结果2、肿瘤引流淋巴结（TDLN）通过局部FRCs的细胞因子分泌重构细胞网络以支持PD-L1+单核细胞

scRNA-seq

该研究揭示，在转移性三阴性乳腺癌（TNBC）中，肿瘤引流淋巴结（TDLNs）内的成纤维网状细胞（FRCs）被肿瘤源性TLR4信号激活，进而高表达趋化因子CCL2和CCL7。这构建了一个趋化梯度，通过CCL2/CCL7-CCR2轴将大量表达PD-L1的免疫抑制性单核细胞招募至TDLNs。这些单核细胞在淋巴结内通过PD-L1和iNOS抑制T细胞功能，从而在肿瘤免疫应答的起始环节破坏抗肿瘤免疫，为远端转移创造有利条件。研究进一步发现，局部联合抑制TLR4和PD-1/PD-L1通路能有效阻断该过程，抑制转移，且TLR4信号特征与TNBC患者的不良预后相关。

结果3、TDLNs中的TNBC来源单核细胞具有免疫抑制功能

TDLNs中的TNBC来源单核细胞具有免疫抑制功能。

从scRNA-seq数据中提取单核细胞与巨噬细胞，并依据特性注释亚群

单核细胞通常可转分化为巨噬细胞，伪时序分析结果证实存在多个中间态群体

4T1 TDLN来源的单核细胞（及程度较轻的67NR来源单核细胞）具有免疫抑制表型，可通过iNOS依赖性的一氧化氮（NO）产生途径抑制T细胞增殖与存活。

结果4、空间转录组学揭示TDLNs中存在免疫抑制性FRC-单核细胞微环境

10× Visium空间转录组学技术结合免疫荧光（IF）

空间分析精确定位了明区生发中心B细胞、CD4+初始T细胞和滤泡树突状细胞至预期解剖位置

IF实验进一步证实单核细胞、T细胞与FRCs的共定位，且这些空间微环境呈现高mMDSC特征评分。综上，免疫抑制性单核细胞主要与TRCs、MedRCs及CD4+效应记忆T细胞共定位于4T1 TDLNs的髓质区和T细胞区，形成免疫抑制微环境。

结果5、TLR4配体在体外诱导FRCs中Ccl2和Ccl7的表达

通过体外实验证实，三阴性乳腺癌细胞通过释放SAA1、FN1、S100A9等内源性TLR4配体，特异性激活肿瘤引流淋巴结中成纤维网状细胞（FRCs）的TLR4信号通路。这种激活显著上调FRCs中趋化因子CCL2和CCL7的表达，进而通过CCL2/CCL7-CCR2轴诱导单核细胞向淋巴结迁移。机制上，TLR4小分子抑制剂TAK-242或MyD88抑制剂TJ-M2010可有效阻断该趋化因子表达及单核细胞招募过程。该发现揭示了肿瘤微环境与淋巴结基质细胞之间的分子对话机制，阐明了TLR4信号通路在塑造免疫抑制性淋巴结微环境中的关键作用。

结果6、协同靶向单核细胞与PD-1可减少肺转移

通过局部给药技术证实，靶向肿瘤引流淋巴结中成纤维网状细胞（FRCs）的TLR4/MyD88信号通路（使用TAK-242或TJ-M2010抑制剂）可显著降低趋化因子CCL2/CCL7表达，减少免疫抑制性单核细胞的招募。更重要的是，局部联合应用TLR4抑制剂与PD-1抗体不仅协同激活T细胞功能（增加CD8+效应记忆T细胞和CD4+活化记忆T细胞），更显著抑制远端肺转移灶形成。

结果7、在人类TNBC患者样本中，TDLNs呈现单核细胞数量增多及FRCs高表达CCL2的特征

仅转移性TNBC细胞系能诱导FRCs上调CCL2和CCL7表达。

在人类三阴性乳腺癌（TNBC）临床样本中，肿瘤引流淋巴结（TDLNs）呈现出与小鼠模型一致的病理特征：单核细胞数量显著增加，且成纤维网状细胞（FRCs）高表达趋化因子CCL2。单细胞测序分析显示，TNBC患者TDLNs中存在CCL2-CCR2配受体轴激活的FRC-单核细胞相互作用网络，其单核细胞表现出比骨髓来源细胞更强的免疫抑制特征。尤其重要的是，内源性TLR4配体特征（SAA1、FN1等）可作为基底样和ER阴性乳腺癌患者的预后不良标志物。

最后来看看方法

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